广州医学院学报
廣州醫學院學報
엄주의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGZHOU MEDICAL COLLEGE
2011年
5期
1-5
,共5页
谢天炽%肖洪广%林勇平%高俊
謝天熾%肖洪廣%林勇平%高俊
사천치%초홍엄%림용평%고준
刺突蛋白%受体结合功能域%蝙蝠SARS样冠状病毒%杆状病毒
刺突蛋白%受體結閤功能域%蝙蝠SARS樣冠狀病毒%桿狀病毒
자돌단백%수체결합공능역%편복SARS양관상병독%간상병독
目的:在昆虫细胞表达系统中表达蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域,并探讨其表达动力学和纯化条件.方法:以PCR扩增蝙蝠SARS样冠状病毒Spike基因的受体结合域片段,产物连接到pMD-T载体,再亚克隆至供体质粒pFAST-HTB,经序列测定确认基因正确克隆,进一步将其转座入Bacmid中,在昆虫细胞Sf9中进行表达,采用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析,并通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白.结果:在昆虫细胞表达系统中表达出蝙蝠SARS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合城片段,当感染复数( multiplicity of infectiin,MOI)为2时,重组病毒感染细胞56 h后,重组蛋白的表达量达到峰值.结论:蝙蝠SAPS样冠状病毒Spike蛋白的受体结合域片段在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达,并可通过镍离子螯合树脂纯化重组蛋白.
目的:在昆蟲細胞錶達繫統中錶達蝙蝠SARS樣冠狀病毒Spike蛋白的受體結閤域,併探討其錶達動力學和純化條件.方法:以PCR擴增蝙蝠SARS樣冠狀病毒Spike基因的受體結閤域片段,產物連接到pMD-T載體,再亞剋隆至供體質粒pFAST-HTB,經序列測定確認基因正確剋隆,進一步將其轉座入Bacmid中,在昆蟲細胞Sf9中進行錶達,採用SDS-PAGE和Western blotting對錶達產物進行分析,併通過鎳離子螯閤樹脂純化重組蛋白.結果:在昆蟲細胞錶達繫統中錶達齣蝙蝠SARS樣冠狀病毒Spike蛋白的受體結閤城片段,噹感染複數( multiplicity of infectiin,MOI)為2時,重組病毒感染細胞56 h後,重組蛋白的錶達量達到峰值.結論:蝙蝠SAPS樣冠狀病毒Spike蛋白的受體結閤域片段在昆蟲細胞錶達繫統中得到瞭有效錶達,併可通過鎳離子螯閤樹脂純化重組蛋白.
목적:재곤충세포표체계통중표체편복SARS양관상병독Spike단백적수체결합역,병탐토기표체동역학화순화조건.방법:이PCR확증편복SARS양관상병독Spike기인적수체결합역편단,산물련접도pMD-T재체,재아극륭지공체질립pFAST-HTB,경서렬측정학인기인정학극륭,진일보장기전좌입Bacmid중,재곤충세포Sf9중진행표체,채용SDS-PAGE화Western blotting대표체산물진행분석,병통과얼리자오합수지순화중조단백.결과:재곤충세포표체계통중표체출편복SARS양관상병독Spike단백적수체결합성편단,당감염복수( multiplicity of infectiin,MOI)위2시,중조병독감염세포56 h후,중조단백적표체량체도봉치.결론:편복SAPS양관상병독Spike단백적수체결합역편단재곤충세포표체계통중득도료유효표체,병가통과얼리자오합수지순화중조단백.
