中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2012年
2期
473-477
,共5页
Bmi-1基因%RNA干扰%U266细胞
Bmi-1基因%RNA榦擾%U266細胞
Bmi-1기인%RNA간우%U266세포
本研究构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立U266-1i稳定细胞株,为下一步Bmi-1的功能研究及应用RNAi技术治疗打下基础.设计、合成1对针对Bmi-l mRNA的shRNA序列,退火后连接到pLVTHM干扰载体上,与psPAX2、PMD2G共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染U266细胞,建立稳定细胞株；应用实时PCR和Western blot技术分别检测U266稳定细胞中Bmi-1及P14 mRNA和蛋白水平的表达,并与对照组进行比较.结果表明,成功构建了针对Bmi-l基因的shRNA慢病毒表达载体,病毒滴度为5 ×107 TU/ml；建立稳定转染的U266细胞株.有效干扰验证显示,shBmi-1能明显降低Bmi-l的mRNA及蛋白水平,而P14的mRNA及蛋白水平则都上调,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定干扰Bmi-1表达的U266细胞株.
本研究構建Bmi-1基因的shRNA慢病毒錶達載體,建立U266-1i穩定細胞株,為下一步Bmi-1的功能研究及應用RNAi技術治療打下基礎.設計、閤成1對針對Bmi-l mRNA的shRNA序列,退火後連接到pLVTHM榦擾載體上,與psPAX2、PMD2G共轉染HEK 293T細胞,包裝產生慢病毒顆粒併測定病毒滴度,感染U266細胞,建立穩定細胞株；應用實時PCR和Western blot技術分彆檢測U266穩定細胞中Bmi-1及P14 mRNA和蛋白水平的錶達,併與對照組進行比較.結果錶明,成功構建瞭針對Bmi-l基因的shRNA慢病毒錶達載體,病毒滴度為5 ×107 TU/ml；建立穩定轉染的U266細胞株.有效榦擾驗證顯示,shBmi-1能明顯降低Bmi-l的mRNA及蛋白水平,而P14的mRNA及蛋白水平則都上調,其差異有統計學意義(P＜0.05).結論:成功構建Bmi-1基因的shRNA慢病毒錶達載體,建立穩定榦擾Bmi-1錶達的U266細胞株.
본연구구건Bmi-1기인적shRNA만병독표체재체,건립U266-1i은정세포주,위하일보Bmi-1적공능연구급응용RNAi기술치료타하기출.설계、합성1대침대Bmi-l mRNA적shRNA서렬,퇴화후련접도pLVTHM간우재체상,여psPAX2、PMD2G공전염HEK 293T세포,포장산생만병독과립병측정병독적도,감염U266세포,건립은정세포주；응용실시PCR화Western blot기술분별검측U266은정세포중Bmi-1급P14 mRNA화단백수평적표체,병여대조조진행비교.결과표명,성공구건료침대Bmi-l기인적shRNA만병독표체재체,병독적도위5 ×107 TU/ml；건립은정전염적U266세포주.유효간우험증현시,shBmi-1능명현강저Bmi-l적mRNA급단백수평,이P14적mRNA급단백수평칙도상조,기차이유통계학의의(P＜0.05).결론:성공구건Bmi-1기인적shRNA만병독표체재체,건립은정간우Bmi-1표체적U266세포주.
