华中师范大学学报（自然科学版）
華中師範大學學報（自然科學版）
화중사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF CENTRAL CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2012年
4期
456-460,467
,共6页
刘航%曹海龙%岳敏%张建平%李曙光%杜昱光
劉航%曹海龍%嶽敏%張建平%李曙光%杜昱光
류항%조해룡%악민%장건평%리서광%두욱광
褐藻胶裂解酶%aly基因%pET23b(+)克隆%Escherichia coli表达
褐藻膠裂解酶%aly基因%pET23b(+)剋隆%Escherichia coli錶達
갈조효렬해매%aly기인%pET23b(+)극륭%Escherichia coli표체
以产褐藻胶裂解酶的紫色链霉菌(Streptom yces violaceoruber)为出发菌株,应用基因工程技术,将褐藻胶裂解酶aly基因进行克隆,并构建了该基因的重组表达载体pET23b(+)-aly.通过表达条件的初步优化,实现了aly基因在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中的成功表达.在IPTG诱导浓度为0.1mmol/L,诱导时间为8h,诱导温度为16℃的条件下,细胞破壁后上清中ALY粗酶液活力为6 U/mg.根据褐藻胶裂解酶ALY的蛋白质结构预测结果推断该酶属于Alginate lyase-2家族,理论pI为8.85,理论分子量大小为28 500,化学式为C1252N1920H356O394S9.SDSPAGE蛋白电泳检测发现,ALY蛋白的分子量约为28000,与预测的蛋白分子量较为接近.
以產褐藻膠裂解酶的紫色鏈黴菌(Streptom yces violaceoruber)為齣髮菌株,應用基因工程技術,將褐藻膠裂解酶aly基因進行剋隆,併構建瞭該基因的重組錶達載體pET23b(+)-aly.通過錶達條件的初步優化,實現瞭aly基因在大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)中的成功錶達.在IPTG誘導濃度為0.1mmol/L,誘導時間為8h,誘導溫度為16℃的條件下,細胞破壁後上清中ALY粗酶液活力為6 U/mg.根據褐藻膠裂解酶ALY的蛋白質結構預測結果推斷該酶屬于Alginate lyase-2傢族,理論pI為8.85,理論分子量大小為28 500,化學式為C1252N1920H356O394S9.SDSPAGE蛋白電泳檢測髮現,ALY蛋白的分子量約為28000,與預測的蛋白分子量較為接近.
이산갈조효렬해매적자색련매균(Streptom yces violaceoruber)위출발균주,응용기인공정기술,장갈조효렬해매aly기인진행극륭,병구건료해기인적중조표체재체pET23b(+)-aly.통과표체조건적초보우화,실현료aly기인재대장간균Escherichia coli BL21(DE3)중적성공표체.재IPTG유도농도위0.1mmol/L,유도시간위8h,유도온도위16℃적조건하,세포파벽후상청중ALY조매액활력위6 U/mg.근거갈조효렬해매ALY적단백질결구예측결과추단해매속우Alginate lyase-2가족,이론pI위8.85,이론분자량대소위28 500,화학식위C1252N1920H356O394S9.SDSPAGE단백전영검측발현,ALY단백적분자량약위28000,여예측적단백분자량교위접근.
