山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2005年
3期
199-202,207
,共5页
迟伟玲%刘贤锡%宋现让%李文通
遲偉玲%劉賢錫%宋現讓%李文通
지위령%류현석%송현양%리문통
鸟氨酸脱羧酶%基因疗法%逆转录病毒%RNA干扰
鳥氨痠脫羧酶%基因療法%逆轉錄病毒%RNA榦擾
조안산탈최매%기인요법%역전록병독%RNA간우
目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的RNAi慢病毒载体.方法:根据ODC mRNA序列,选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链,退火后插入pSuper载体的H1RNA启动子后产生pRiODC,将其中的ODC shRNA表达结构酶切插入慢病毒转移质粒pHRCMVGFP,产生pHRiODC/GFP.与△R8.2和pCMVVSVG共转染HEK293T细胞,包装产生慢病毒,分别采用转导HEK293T细胞和ReaI-Time RT-PCR的方法测定慢病毒的功能滴度和病毒RNA分子拷贝数.结果:酶切和测序证实,pRiODC质粒构建正确,产生能同时表达GFP和转录产生ODC shRNA的慢病毒转移质粒PHRiODC/GFP,未浓缩及浓缩病毒悬液的功能滴度分别为6.3×104TU/ml和7×106 TU/ml,RNA拷贝数分别为3.4×108copies/ml和3.6×1010copies/ml.结论:成功构建人ODC基因RNAi慢病毒载体,为通过阻断ODC基因表达治疗恶性肿瘤奠定了基础.
目的:構建人鳥氨痠脫羧酶(ODC)基因的RNAi慢病毒載體.方法:根據ODC mRNA序列,選擇3箇19nts的靶序列,設計併閤成包含各正反義靶序列的互補DNA鏈,退火後插入pSuper載體的H1RNA啟動子後產生pRiODC,將其中的ODC shRNA錶達結構酶切插入慢病毒轉移質粒pHRCMVGFP,產生pHRiODC/GFP.與△R8.2和pCMVVSVG共轉染HEK293T細胞,包裝產生慢病毒,分彆採用轉導HEK293T細胞和ReaI-Time RT-PCR的方法測定慢病毒的功能滴度和病毒RNA分子拷貝數.結果:酶切和測序證實,pRiODC質粒構建正確,產生能同時錶達GFP和轉錄產生ODC shRNA的慢病毒轉移質粒PHRiODC/GFP,未濃縮及濃縮病毒懸液的功能滴度分彆為6.3×104TU/ml和7×106 TU/ml,RNA拷貝數分彆為3.4×108copies/ml和3.6×1010copies/ml.結論:成功構建人ODC基因RNAi慢病毒載體,為通過阻斷ODC基因錶達治療噁性腫瘤奠定瞭基礎.
목적:구건인조안산탈최매(ODC)기인적RNAi만병독재체.방법:근거ODC mRNA서렬,선택3개19nts적파서렬,설계병합성포함각정반의파서렬적호보DNA련,퇴화후삽입pSuper재체적H1RNA계동자후산생pRiODC,장기중적ODC shRNA표체결구매절삽입만병독전이질립pHRCMVGFP,산생pHRiODC/GFP.여△R8.2화pCMVVSVG공전염HEK293T세포,포장산생만병독,분별채용전도HEK293T세포화ReaI-Time RT-PCR적방법측정만병독적공능적도화병독RNA분자고패수.결과:매절화측서증실,pRiODC질립구건정학,산생능동시표체GFP화전록산생ODC shRNA적만병독전이질립PHRiODC/GFP,미농축급농축병독현액적공능적도분별위6.3×104TU/ml화7×106 TU/ml,RNA고패수분별위3.4×108copies/ml화3.6×1010copies/ml.결론:성공구건인ODC기인RNAi만병독재체,위통과조단ODC기인표체치료악성종류전정료기출.
