微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
2期
141-146
,共6页
黄隽%王海彬%罗家立%白骅
黃雋%王海彬%囉傢立%白驊
황준%왕해빈%라가립%백화
接合转移%特异性标记序列%同源重组%生产菌种
接閤轉移%特異性標記序列%同源重組%生產菌種
접합전이%특이성표기서렬%동원중조%생산균충
通过小片段基因组文库的构建获得工业生产菌HS007的若干基因组片段,并以大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pHJL400为载体,构建了5个插入了特异性标记序列及抗性筛选标记的重组质粒pHJL02AFOH,pHJL07AFOH,pHJL08AFOH,pHJL10AFOH和pHJL12AFOH.利用这些质粒转化工业生产菌株HS007,获得具有特异性标记序列和相应抗性的标记菌株02-72,07-44,08-02,10-81和12-58,其中02-72和12-58的生产能力不受插入片段的影响.利用重组质粒pSP02AFOH上抗性标记两端两个FRT序列的分子内重组去除抗性标记,并以大肠杆菌一链霉菌穿梭质粒pGH112替换该质粒的载体部分,得到重组质粒pGH02FH.以pGH02FH转化标记菌株02-72,获得具有特异性标记序列而没有相应抗性的菌株02-72-36.发酵结果表明,标记片段的插入不影响菌株02-72-36的生产能力.本方法建立了链霉菌工业菌种基因组标记的技术平台.
通過小片段基因組文庫的構建穫得工業生產菌HS007的若榦基因組片段,併以大腸桿菌-鏈黴菌穿梭質粒pHJL400為載體,構建瞭5箇插入瞭特異性標記序列及抗性篩選標記的重組質粒pHJL02AFOH,pHJL07AFOH,pHJL08AFOH,pHJL10AFOH和pHJL12AFOH.利用這些質粒轉化工業生產菌株HS007,穫得具有特異性標記序列和相應抗性的標記菌株02-72,07-44,08-02,10-81和12-58,其中02-72和12-58的生產能力不受插入片段的影響.利用重組質粒pSP02AFOH上抗性標記兩耑兩箇FRT序列的分子內重組去除抗性標記,併以大腸桿菌一鏈黴菌穿梭質粒pGH112替換該質粒的載體部分,得到重組質粒pGH02FH.以pGH02FH轉化標記菌株02-72,穫得具有特異性標記序列而沒有相應抗性的菌株02-72-36.髮酵結果錶明,標記片段的插入不影響菌株02-72-36的生產能力.本方法建立瞭鏈黴菌工業菌種基因組標記的技術平檯.
통과소편단기인조문고적구건획득공업생산균HS007적약간기인조편단,병이대장간균-련매균천사질립pHJL400위재체,구건료5개삽입료특이성표기서렬급항성사선표기적중조질립pHJL02AFOH,pHJL07AFOH,pHJL08AFOH,pHJL10AFOH화pHJL12AFOH.이용저사질립전화공업생산균주HS007,획득구유특이성표기서렬화상응항성적표기균주02-72,07-44,08-02,10-81화12-58,기중02-72화12-58적생산능력불수삽입편단적영향.이용중조질립pSP02AFOH상항성표기량단량개FRT서렬적분자내중조거제항성표기,병이대장간균일련매균천사질립pGH112체환해질립적재체부분,득도중조질립pGH02FH.이pGH02FH전화표기균주02-72,획득구유특이성표기서렬이몰유상응항성적균주02-72-36.발효결과표명,표기편단적삽입불영향균주02-72-36적생산능력.본방법건립료련매균공업균충기인조표기적기술평태.
