生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
3期
409-414
,共6页
杨欢利%赵西彪%宋晓娟%丁家桐
楊歡利%趙西彪%宋曉娟%丁傢桐
양환리%조서표%송효연%정가동
山羊促卵泡素%长效类似物基因%毕赤酵母
山羊促卵泡素%長效類似物基因%畢赤酵母
산양촉란포소%장효유사물기인%필적효모
为了获得长效FSH制剂,利用重叠PCR技术将山羊FSH的α,β亚单位,通过hCGβ单位羧基末端延长肽(CTP)基因序列的连接,构建成单链长效类似物基因FSHβ-CTP-α.将其克隆至表达载体pPIC9K,重组载体线性化处理后电转化至毕赤酵母GS115中,经判型和G418筛选后获得高拷贝菌株His+Mut+,经甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析表明:重组FSHB-CTP-α的转化子可以正确有效地表达目的蛋白,分子量约为29 kD.放射免疫分析法(RIA)测定表达上清,高拷贝转化子的平均表达量为91.849 mIU/mL,显著高于低拷贝转化子的平均37.419 mIU/mL的表达量,为FSH的结构研究和长效FSH制剂的生产奠定了基础.
為瞭穫得長效FSH製劑,利用重疊PCR技術將山羊FSH的α,β亞單位,通過hCGβ單位羧基末耑延長肽(CTP)基因序列的連接,構建成單鏈長效類似物基因FSHβ-CTP-α.將其剋隆至錶達載體pPIC9K,重組載體線性化處理後電轉化至畢赤酵母GS115中,經判型和G418篩選後穫得高拷貝菌株His+Mut+,經甲醇誘導錶達後,進行SDS-PAGE和Western blot分析錶明:重組FSHB-CTP-α的轉化子可以正確有效地錶達目的蛋白,分子量約為29 kD.放射免疫分析法(RIA)測定錶達上清,高拷貝轉化子的平均錶達量為91.849 mIU/mL,顯著高于低拷貝轉化子的平均37.419 mIU/mL的錶達量,為FSH的結構研究和長效FSH製劑的生產奠定瞭基礎.
위료획득장효FSH제제,이용중첩PCR기술장산양FSH적α,β아단위,통과hCGβ단위최기말단연장태(CTP)기인서렬적련접,구건성단련장효유사물기인FSHβ-CTP-α.장기극륭지표체재체pPIC9K,중조재체선성화처리후전전화지필적효모GS115중,경판형화G418사선후획득고고패균주His+Mut+,경갑순유도표체후,진행SDS-PAGE화Western blot분석표명:중조FSHB-CTP-α적전화자가이정학유효지표체목적단백,분자량약위29 kD.방사면역분석법(RIA)측정표체상청,고고패전화자적평균표체량위91.849 mIU/mL,현저고우저고패전화자적평균37.419 mIU/mL적표체량,위FSH적결구연구화장효FSH제제적생산전정료기출.
