北京医学
北京醫學
북경의학
BEIJING MEDICAL JOURNAL
2008年
11期
641-643
,共3页
包怡华%辛若雷%邓洁%王芳%钱渊%吴建新%张霆
包怡華%辛若雷%鄧潔%王芳%錢淵%吳建新%張霆
포이화%신약뢰%산길%왕방%전연%오건신%장정
甲3型流感病毒%抗原分析%原核表达%间接免疫荧光法
甲3型流感病毒%抗原分析%原覈錶達%間接免疫熒光法
갑3형류감병독%항원분석%원핵표체%간접면역형광법
目的 探讨抗重组人甲3型流感病毒基质蛋白(M1)抗体在临床检测中应用的可行性.方法 在生物信息学分析的基础上,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人甲3型流感病毒感染细胞中获得目的基因,构建pET-28c(+)/IFV.M1P2重组质粒并在BL21 DE3中诱导表达;重组蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体.采用间接免疫荧光法检测重组蛋白抗体与病毒感染细胞和临床标本的反应性,并与流感病毒凝血抑制试验结果比较分析,确定重组蛋白抗体的灵敏度和特异性.结果 间接免疫荧光法检测抗M1P2重组蛋白抗体与人甲3型、甲1型流感病毒反应的抗体滴度可达1∶1200和1∶1000,与乙型流感病毒及其他呼吸道常见病毒无特异性反应.同样方法检测262例上呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本,阳性18例(6.87%),凝血抑制试验阳性24例(9.16%).与凝血抑制试验相比,间接免疫荧光法检测敏感性为62.5%,特异性为98.7%.结论重组M1P2蛋白具有较强的免疫原性,可模拟天然病毒蛋白诱导产生较强的抗人甲3型流感病毒抗体,该抗体具有较高的反应特异性和一定的灵敏度.
目的 探討抗重組人甲3型流感病毒基質蛋白(M1)抗體在臨床檢測中應用的可行性.方法 在生物信息學分析的基礎上,經逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)從人甲3型流感病毒感染細胞中穫得目的基因,構建pET-28c(+)/IFV.M1P2重組質粒併在BL21 DE3中誘導錶達;重組蛋白經親和層析純化後免疫傢兔製備多剋隆抗體.採用間接免疫熒光法檢測重組蛋白抗體與病毒感染細胞和臨床標本的反應性,併與流感病毒凝血抑製試驗結果比較分析,確定重組蛋白抗體的靈敏度和特異性.結果 間接免疫熒光法檢測抗M1P2重組蛋白抗體與人甲3型、甲1型流感病毒反應的抗體滴度可達1∶1200和1∶1000,與乙型流感病毒及其他呼吸道常見病毒無特異性反應.同樣方法檢測262例上呼吸道感染患兒鼻嚥分泌物標本,暘性18例(6.87%),凝血抑製試驗暘性24例(9.16%).與凝血抑製試驗相比,間接免疫熒光法檢測敏感性為62.5%,特異性為98.7%.結論重組M1P2蛋白具有較彊的免疫原性,可模擬天然病毒蛋白誘導產生較彊的抗人甲3型流感病毒抗體,該抗體具有較高的反應特異性和一定的靈敏度.
목적 탐토항중조인갑3형류감병독기질단백(M1)항체재림상검측중응용적가행성.방법 재생물신식학분석적기출상,경역전록-취합매련반응(RT-PCR)종인갑3형류감병독감염세포중획득목적기인,구건pET-28c(+)/IFV.M1P2중조질립병재BL21 DE3중유도표체;중조단백경친화층석순화후면역가토제비다극륭항체.채용간접면역형광법검측중조단백항체여병독감염세포화림상표본적반응성,병여류감병독응혈억제시험결과비교분석,학정중조단백항체적령민도화특이성.결과 간접면역형광법검측항M1P2중조단백항체여인갑3형、갑1형류감병독반응적항체적도가체1∶1200화1∶1000,여을형류감병독급기타호흡도상견병독무특이성반응.동양방법검측262례상호흡도감염환인비인분비물표본,양성18례(6.87%),응혈억제시험양성24례(9.16%).여응혈억제시험상비,간접면역형광법검측민감성위62.5%,특이성위98.7%.결론중조M1P2단백구유교강적면역원성,가모의천연병독단백유도산생교강적항인갑3형류감병독항체,해항체구유교고적반응특이성화일정적령민도.
