CAJ | 학술논문

背景:体外培养扩增获取大量、高纯度的神经干细胞是其移植应用的前提,无血清培养主要目的是去除血清中可能诱导神经干细胞分化的生长因子等干扰因素.目的:在无血清条件下体外分离培养大鼠胚胎神经干细胞,并观察其生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-03/2006-03在河北医科大学第三医院中心实验室完成.材料:14～16 d龄SD胎鼠2只,由河北医科大学实验动物中心提供.方法:无菌条件下取胎鼠大脑皮质,剪碎后机械分离法制作单细胞悬液,加入含B27神经营养添加剂的无血清MEM/F12培养基进行培养,1周后传代.主要观察指标:免疫荧光染色鉴定神经干细胞巢蛋白的表达及传代能力,加入含血清的MEM/F12培养基诱导分化1周后免疫组化检测细胞分化情况.结果:培养48～72h细胞聚集悬浮生长,形成典犁的神经球,呈神经干细胞特异性抗原巢蛋白阳性表达.传代的神经干细胞置于BrdU培养液中5～7d形成次代神经球,呈BrdU阳性,表明次代神经球中绝大部分细胞为传代后细胞分裂而来,具有传代能力,传代后加入含血清的培养基后可以分化为微管相关蛋白2阳性细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞.结论:利用无血清培养技术可成功从胎鼠脑皮质中分离培养出具有分裂增殖能力及多向分化潜能的神经干细胞.
배경:체외배양확증획취대량、고순도적신경간세포시기이식응용적전제,무혈청배양주요목적시거제혈청중가능유도신경간세포분화적생장인자등간우인소.목적:재무혈청조건하체외분리배양대서배태신경간세포,병관찰기생물학특성.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2005-03/2006-03재하북의과대학제삼의원중심실험실완성.재료:14～16 d령SD태서2지,유하북의과대학실험동물중심제공.방법:무균조건하취태서대뇌피질,전쇄후궤계분리법제작단세포현액,가입함B27신경영양첨가제적무혈청MEM/F12배양기진행배양,1주후전대.주요관찰지표:면역형광염색감정신경간세포소단백적표체급전대능력,가입함혈청적MEM/F12배양기유도분화1주후면역조화검측세포분화정황.결과:배양48～72h세포취집현부생장,형성전리적신경구,정신경간세포특이성항원소단백양성표체.전대적신경간세포치우BrdU배양액중5～7d형성차대신경구,정BrdU양성,표명차대신경구중절대부분세포위전대후세포분렬이래,구유전대능력,전대후가입함혈청적배양기후가이분화위미관상관단백2양성세포화효질섬유산성단백양성세포.결론:이용무혈청배양기술가성공종태서뇌피질중분리배양출구유분렬증식능력급다향분화잠능적신경간세포.