微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2010年
1期
31-35
,共5页
高波%段志坚%徐薇%熊思东
高波%段誌堅%徐薇%熊思東
고파%단지견%서미%웅사동
TRIM22%SPRY结构域%突变%表达%亚细胞定位
TRIM22%SPRY結構域%突變%錶達%亞細胞定位
TRIM22%SPRY결구역%돌변%표체%아세포정위
本文旨在探讨TRIM22 C端SRPY结构域对其转录、翻译及亚细胞定位的影响.以野生型TRIM22真核表达质粒为模板,扩增出C端SPRY结构域缺失的TRIM22基因片段,并将其克隆入真核表达质粒pcDNA3.1.将野生型和突变型TRIM22真核表达载体分别转染高分化人肝癌细胞株HepG2.通过反转录-聚合酶链反应检测其mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测其蛋白表达水平,并通过间接免疫荧光法检测其亚细胞内定位.结果成功构建了C端SPRY结构域缺失的TRIM22真核表达质粒.转染HepG2细胞后,TRIM22 SPRY结构域缺失突变体在转录和翻译水平上均与野生型TRIM22无明显差异,但TRIM22 SPRY结构域缺失突变体完全丧失了核定位能力,这为进一步研究SPRY结构域在TRIM22抗病毒过程中所发挥的作用及机制提供了有益的启示.
本文旨在探討TRIM22 C耑SRPY結構域對其轉錄、翻譯及亞細胞定位的影響.以野生型TRIM22真覈錶達質粒為模闆,擴增齣C耑SPRY結構域缺失的TRIM22基因片段,併將其剋隆入真覈錶達質粒pcDNA3.1.將野生型和突變型TRIM22真覈錶達載體分彆轉染高分化人肝癌細胞株HepG2.通過反轉錄-聚閤酶鏈反應檢測其mRNA錶達水平,蛋白質免疫印跡法(Western blot)檢測其蛋白錶達水平,併通過間接免疫熒光法檢測其亞細胞內定位.結果成功構建瞭C耑SPRY結構域缺失的TRIM22真覈錶達質粒.轉染HepG2細胞後,TRIM22 SPRY結構域缺失突變體在轉錄和翻譯水平上均與野生型TRIM22無明顯差異,但TRIM22 SPRY結構域缺失突變體完全喪失瞭覈定位能力,這為進一步研究SPRY結構域在TRIM22抗病毒過程中所髮揮的作用及機製提供瞭有益的啟示.
본문지재탐토TRIM22 C단SRPY결구역대기전록、번역급아세포정위적영향.이야생형TRIM22진핵표체질립위모판,확증출C단SPRY결구역결실적TRIM22기인편단,병장기극륭입진핵표체질립pcDNA3.1.장야생형화돌변형TRIM22진핵표체재체분별전염고분화인간암세포주HepG2.통과반전록-취합매련반응검측기mRNA표체수평,단백질면역인적법(Western blot)검측기단백표체수평,병통과간접면역형광법검측기아세포내정위.결과성공구건료C단SPRY결구역결실적TRIM22진핵표체질립.전염HepG2세포후,TRIM22 SPRY결구역결실돌변체재전록화번역수평상균여야생형TRIM22무명현차이,단TRIM22 SPRY결구역결실돌변체완전상실료핵정위능력,저위진일보연구SPRY결구역재TRIM22항병독과정중소발휘적작용급궤제제공료유익적계시.
