中国临床神经科学
中國臨床神經科學
중국림상신경과학
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL NEUROSCIENCES
2010年
3期
248-251
,共4页
顾小宇%赵卫国%尚寒冰%张卫峰%赵开军%赵建祥
顧小宇%趙衛國%尚寒冰%張衛峰%趙開軍%趙建祥
고소우%조위국%상한빙%장위봉%조개군%조건상
NUMB%短发夹RNA%胶质瘤%p53基因
NUMB%短髮夾RNA%膠質瘤%p53基因
NUMB%단발협RNA%효질류%p53기인
目的:构建NUMB shRNA(短发夹RNA)真核表达载体,体外评价其对人U87胶质瘤细胞NUMB及p53 mRNA及P53蛋白表达的影响.方法:免疫荧光细胞化学染色证实NUMB、P53蛋白在U87胶质瘤细胞的表达.构建针对 NUMB mRNA表达的一对反向shRNA互补序列,克隆入psilencer 3.1/hygro真核表达载体,在测序鉴定无误后将NUMB shRNA转染至U87胶质瘤细胞,用RT-PCR和Western blot检测U87细胞转染前后NUMB及p53基因和P53蛋白的表达水平变化.结果:基因测序证实质粒构建成功,RT-PCR和Western blot结果证实U87细胞转染NUMB shRNA 后48 h NUMB mRNA及蛋白表达水平均下降,P53蛋白表达水平也明显下调.结论:在U87胶质瘤细胞中,NUMB参与了P53蛋白表达水平的调控,提示NUMB是一个潜在的脑胶质瘤基因及药物治疗的靶点.
目的:構建NUMB shRNA(短髮夾RNA)真覈錶達載體,體外評價其對人U87膠質瘤細胞NUMB及p53 mRNA及P53蛋白錶達的影響.方法:免疫熒光細胞化學染色證實NUMB、P53蛋白在U87膠質瘤細胞的錶達.構建針對 NUMB mRNA錶達的一對反嚮shRNA互補序列,剋隆入psilencer 3.1/hygro真覈錶達載體,在測序鑒定無誤後將NUMB shRNA轉染至U87膠質瘤細胞,用RT-PCR和Western blot檢測U87細胞轉染前後NUMB及p53基因和P53蛋白的錶達水平變化.結果:基因測序證實質粒構建成功,RT-PCR和Western blot結果證實U87細胞轉染NUMB shRNA 後48 h NUMB mRNA及蛋白錶達水平均下降,P53蛋白錶達水平也明顯下調.結論:在U87膠質瘤細胞中,NUMB參與瞭P53蛋白錶達水平的調控,提示NUMB是一箇潛在的腦膠質瘤基因及藥物治療的靶點.
목적:구건NUMB shRNA(단발협RNA)진핵표체재체,체외평개기대인U87효질류세포NUMB급p53 mRNA급P53단백표체적영향.방법:면역형광세포화학염색증실NUMB、P53단백재U87효질류세포적표체.구건침대 NUMB mRNA표체적일대반향shRNA호보서렬,극륭입psilencer 3.1/hygro진핵표체재체,재측서감정무오후장NUMB shRNA전염지U87효질류세포,용RT-PCR화Western blot검측U87세포전염전후NUMB급p53기인화P53단백적표체수평변화.결과:기인측서증실질립구건성공,RT-PCR화Western blot결과증실U87세포전염NUMB shRNA 후48 h NUMB mRNA급단백표체수평균하강,P53단백표체수평야명현하조.결론:재U87효질류세포중,NUMB삼여료P53단백표체수평적조공,제시NUMB시일개잠재적뇌효질류기인급약물치료적파점.
