军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2010年
6期
543-546
,共4页
牟春花%刘玉%董洁%吴娜%高亚萍%邵宁生%杨光
牟春花%劉玉%董潔%吳娜%高亞萍%邵寧生%楊光
모춘화%류옥%동길%오나%고아평%소저생%양광
葡萄球菌,金黄色%LytM%溶菌作用%多克隆抗体
葡萄毬菌,金黃色%LytM%溶菌作用%多剋隆抗體
포도구균,금황색%LytM%용균작용%다극륭항체
目的 利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌(SAU)糖肽水解酶LytM及其C端185～316 aa蛋白(LytM185～316),检测其生物学活性,并制备多克隆抗体,为检测LytM活性体的天然形式和产生机制以及研究LytM蛋白在SAU感染中的生物学意义奠定基础.方法 以SAU 8325-4基因组为模板,PCR扩增lytM及其C端基因,并将其克隆入pET-28a构建重组表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导阳性克隆表达目的 蛋白,通过亲和纯化获得目的 蛋白LytM及LytM185～316,并制备LytM的多克隆抗体;用薄层层析法测定LytM以及LytM185～316的生物活性,并检测重组蛋白对SAU 8325-4菌体的裂解作用.结果 成功构建了表达载体pET-28a-LytM和pET-28a-LytM185～316,获得了纯度较高的重组蛋白LytM及LytM185～316,经测定LytM不能够水解底物而LytM185～316具有较强的糖肽水解酶活性.制备了高效价的抗LytM的多克隆抗体,并证实其可以与LytM及LytM185～316 特异性结合.结论 只含有C端185～316 aa的重组蛋白能够水解底物,而全长的LytM不具有糖肽水解酶活性.
目的 利用大腸桿菌重組錶達金黃色葡萄毬菌(SAU)糖肽水解酶LytM及其C耑185～316 aa蛋白(LytM185～316),檢測其生物學活性,併製備多剋隆抗體,為檢測LytM活性體的天然形式和產生機製以及研究LytM蛋白在SAU感染中的生物學意義奠定基礎.方法 以SAU 8325-4基因組為模闆,PCR擴增lytM及其C耑基因,併將其剋隆入pET-28a構建重組錶達載體,轉化入大腸桿菌BL21(DE3),利用IPTG誘導暘性剋隆錶達目的 蛋白,通過親和純化穫得目的 蛋白LytM及LytM185～316,併製備LytM的多剋隆抗體;用薄層層析法測定LytM以及LytM185～316的生物活性,併檢測重組蛋白對SAU 8325-4菌體的裂解作用.結果 成功構建瞭錶達載體pET-28a-LytM和pET-28a-LytM185～316,穫得瞭純度較高的重組蛋白LytM及LytM185～316,經測定LytM不能夠水解底物而LytM185～316具有較彊的糖肽水解酶活性.製備瞭高效價的抗LytM的多剋隆抗體,併證實其可以與LytM及LytM185～316 特異性結閤.結論 隻含有C耑185～316 aa的重組蛋白能夠水解底物,而全長的LytM不具有糖肽水解酶活性.
목적 이용대장간균중조표체금황색포도구균(SAU)당태수해매LytM급기C단185～316 aa단백(LytM185～316),검측기생물학활성,병제비다극륭항체,위검측LytM활성체적천연형식화산생궤제이급연구LytM단백재SAU감염중적생물학의의전정기출.방법 이SAU 8325-4기인조위모판,PCR확증lytM급기C단기인,병장기극륭입pET-28a구건중조표체재체,전화입대장간균BL21(DE3),이용IPTG유도양성극륭표체목적 단백,통과친화순화획득목적 단백LytM급LytM185～316,병제비LytM적다극륭항체;용박층층석법측정LytM이급LytM185～316적생물활성,병검측중조단백대SAU 8325-4균체적렬해작용.결과 성공구건료표체재체pET-28a-LytM화pET-28a-LytM185～316,획득료순도교고적중조단백LytM급LytM185～316,경측정LytM불능구수해저물이LytM185～316구유교강적당태수해매활성.제비료고효개적항LytM적다극륭항체,병증실기가이여LytM급LytM185～316 특이성결합.결론 지함유C단185～316 aa적중조단백능구수해저물,이전장적LytM불구유당태수해매활성.
