分析测试学报
分析測試學報
분석측시학보
JOURNAL OF INSTRUMENTAL ANALYSIS
2011年
5期
498-502
,共5页
谢希晖%王荣%谢华%贾正平%张爱梅%孟宪栋%马骏
謝希暉%王榮%謝華%賈正平%張愛梅%孟憲棟%馬駿
사희휘%왕영%사화%가정평%장애매%맹헌동%마준
胃癌%杂合缺失%毛细管电泳%聚丙烯酰胺凝胶电泳%单链构象多态性%限制性片段长度多态性
胃癌%雜閤缺失%毛細管電泳%聚丙烯酰胺凝膠電泳%單鏈構象多態性%限製性片段長度多態性
위암%잡합결실%모세관전영%취병희선알응효전영%단련구상다태성%한제성편단장도다태성
采用聚合酶链反应(PCR)扩增了胃癌及癌旁正常组织中APC基因易发生杂合缺失的第十一外显子的部分碱基序列,扩增样品分别经96℃变性和Rsa Ⅰ酶切处理,以毛细管电泳(CE)-单链构象多态性(SSCP)、CE-限制性片段长度多态性(RFLP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-SSCP对其杂合缺失情况进行检测.PAGE凝胶浓度为15%.CE检测条件:以3.0%聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质,1×TBE(pH 8.2)为电泳缓冲液,分离电压15 kV,温度15℃,结合激光诱导荧光(λex=488 nm,λem=520 nm)检测.不同方法的检出率由高到低分别为:CE-SSCP(30%)＞PAGE-SSCP(25%)＞CE-RFLP(20%).并证实了APC基因易发生杂合缺失在胃癌组织中的突变率高于10%,且CE-SSCP方法较PAGE-SSCP和CE-RFLP的检出率高.CE-SSCP检测方法具有快速、灵敏度高等优点,可为建立简便可靠的胃癌临床早期诊断方法奠定基础.
採用聚閤酶鏈反應(PCR)擴增瞭胃癌及癌徬正常組織中APC基因易髮生雜閤缺失的第十一外顯子的部分堿基序列,擴增樣品分彆經96℃變性和Rsa Ⅰ酶切處理,以毛細管電泳(CE)-單鏈構象多態性(SSCP)、CE-限製性片段長度多態性(RFLP)、聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)-SSCP對其雜閤缺失情況進行檢測.PAGE凝膠濃度為15%.CE檢測條件:以3.0%聚環氧乙烷(PEO)為篩分介質,1×TBE(pH 8.2)為電泳緩遲液,分離電壓15 kV,溫度15℃,結閤激光誘導熒光(λex=488 nm,λem=520 nm)檢測.不同方法的檢齣率由高到低分彆為:CE-SSCP(30%)＞PAGE-SSCP(25%)＞CE-RFLP(20%).併證實瞭APC基因易髮生雜閤缺失在胃癌組織中的突變率高于10%,且CE-SSCP方法較PAGE-SSCP和CE-RFLP的檢齣率高.CE-SSCP檢測方法具有快速、靈敏度高等優點,可為建立簡便可靠的胃癌臨床早期診斷方法奠定基礎.
채용취합매련반응(PCR)확증료위암급암방정상조직중APC기인역발생잡합결실적제십일외현자적부분감기서렬,확증양품분별경96℃변성화Rsa Ⅰ매절처리,이모세관전영(CE)-단련구상다태성(SSCP)、CE-한제성편단장도다태성(RFLP)、취병희선알응효전영(PAGE)-SSCP대기잡합결실정황진행검측.PAGE응효농도위15%.CE검측조건:이3.0%취배양을완(PEO)위사분개질,1×TBE(pH 8.2)위전영완충액,분리전압15 kV,온도15℃,결합격광유도형광(λex=488 nm,λem=520 nm)검측.불동방법적검출솔유고도저분별위:CE-SSCP(30%)＞PAGE-SSCP(25%)＞CE-RFLP(20%).병증실료APC기인역발생잡합결실재위암조직중적돌변솔고우10%,차CE-SSCP방법교PAGE-SSCP화CE-RFLP적검출솔고.CE-SSCP검측방법구유쾌속、령민도고등우점,가위건립간편가고적위암림상조기진단방법전정기출.
