CAJ | 학술논문

目的原核表达蓝氏贾第鞭毛虫的α-7.1、α-11贾第素蛋白.方法经RT-PCR获得α-7.1、α-11贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-7.1及pET-28a(+)-α-11,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3).IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测.结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-7.1和 pET-28a(+)-α-11,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约43kD和35kD的位置分别出现目的蛋白条带,与理论值相符;通过相应α-7.1、α-11贾第素抗血清的Western blot证实两种贾第素重组蛋白的抗原活性良好;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-7.1、α-11贾第素融合蛋白.结论成功地克隆、表达并纯化了具有良好抗原活性的α-7.1、α-11贾第素蛋白.
목적 원핵표체람씨가제편모충적α-7.1、α-11가제소단백.방법 경RT-PCR획득α-7.1、α-11가제소기인편단,경쌍매절련입원핵표체재체pET-28a(+),구건성위중조표체재체pET-28a(+)-α-7.1급pET-28a(+)-α-11,병전화대장간균Rosetta(DE3).IPTG유도후,수집균체,렬해후진행SDS-PAGE급Western blot검측.결과 성공구건료원핵표체재체pET-28a(+)-α-7.1화 pET-28a(+)-α-11,경IPTG유도후,재대장간균중고효표체,SDS-PAGE급Western blot분석현시,재상대분자량약43kD화35kD적위치분별출현목적 단백조대,여이론치상부;통과상응α-7.1、α-11가제소항혈청적Western blot증실량충가제소중조단백적항원활성량호;경Ni-NTA친화층석주순화획득료고순도적중조적α-7.1、α-11가제소융합단백.결론 성공지극륭、표체병순화료구유량호항원활성적α-7.1、α-11가제소단백.