重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2012年
4期
289-293
,共5页
何志慧%蒋莉%陈恒胜%张晓萍
何誌慧%蔣莉%陳恆勝%張曉萍
하지혜%장리%진항성%장효평
pCREB%海马脑片%痫性发作%凋亡
pCREB%海馬腦片%癇性髮作%凋亡
pCREB%해마뇌편%간성발작%조망
目的:观察痫性发作对体外培养海马脑片的损伤作用,研究细胞磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(PhosphorylatedcAMP response element-binding protein,pCREB)对损伤海马神经元的作用.方法:以培养11d的海马脑片为研究对象,随机分为3组:(1)正常对照组:正常海马脑片培养液培养至14 d.(2)痫性发作模型组:正常海马脑片培养液培养至14 d,更换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1h后终止培养.(3)抗pCREB抗体干预组:用含pCREB抗体的海马脑片培养液(pCREB抗体终浓度为5μg/ml)预培养3d,换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1h后终止培养.采用TUNEL原位末端标记法检测各组培养海马脑片凋亡细胞；免疫组化染色观察海马脑片神经元内pCREB蛋白的表达变化.结果:(1)痫性发作模型组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(95.44±14.30)显著多于对照组(41.30±9.30)(P ＜0.05)；pCREB表达(201.36±19.31)较对照组(75.12± 13.71)显著升高(P＜0.05).(2)抗pCREB抗体干预组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(140.88 ±18.32)较痫性发作模型组显著增多(P＜0.05)；pCREB表达(172.60±17.68)较对照组显著升高、较模型组显著降低(P＜0.05).结论:(1)痫性发作可以增加体外培养海马脑片神经细胞凋亡发生,加重神经元损伤.(2)痫性发作后海马脑片神经细胞CREB的磷酸化增强,阻断CREB的磷酸化可导致神经细胞凋亡加重.
目的:觀察癇性髮作對體外培養海馬腦片的損傷作用,研究細胞燐痠化cAMP反應元件結閤蛋白(PhosphorylatedcAMP response element-binding protein,pCREB)對損傷海馬神經元的作用.方法:以培養11d的海馬腦片為研究對象,隨機分為3組:(1)正常對照組:正常海馬腦片培養液培養至14 d.(2)癇性髮作模型組:正常海馬腦片培養液培養至14 d,更換為含匹囉卡品(0.5 mmol/L)的完全培養液作用1h後終止培養.(3)抗pCREB抗體榦預組:用含pCREB抗體的海馬腦片培養液(pCREB抗體終濃度為5μg/ml)預培養3d,換為含匹囉卡品(0.5 mmol/L)的完全培養液作用1h後終止培養.採用TUNEL原位末耑標記法檢測各組培養海馬腦片凋亡細胞；免疫組化染色觀察海馬腦片神經元內pCREB蛋白的錶達變化.結果:(1)癇性髮作模型組:海馬腦片CA1區髮生凋亡的細胞(95.44±14.30)顯著多于對照組(41.30±9.30)(P ＜0.05)；pCREB錶達(201.36±19.31)較對照組(75.12± 13.71)顯著升高(P＜0.05).(2)抗pCREB抗體榦預組:海馬腦片CA1區髮生凋亡的細胞(140.88 ±18.32)較癇性髮作模型組顯著增多(P＜0.05)；pCREB錶達(172.60±17.68)較對照組顯著升高、較模型組顯著降低(P＜0.05).結論:(1)癇性髮作可以增加體外培養海馬腦片神經細胞凋亡髮生,加重神經元損傷.(2)癇性髮作後海馬腦片神經細胞CREB的燐痠化增彊,阻斷CREB的燐痠化可導緻神經細胞凋亡加重.
목적:관찰간성발작대체외배양해마뇌편적손상작용,연구세포린산화cAMP반응원건결합단백(PhosphorylatedcAMP response element-binding protein,pCREB)대손상해마신경원적작용.방법:이배양11d적해마뇌편위연구대상,수궤분위3조:(1)정상대조조:정상해마뇌편배양액배양지14 d.(2)간성발작모형조:정상해마뇌편배양액배양지14 d,경환위함필라잡품(0.5 mmol/L)적완전배양액작용1h후종지배양.(3)항pCREB항체간예조:용함pCREB항체적해마뇌편배양액(pCREB항체종농도위5μg/ml)예배양3d,환위함필라잡품(0.5 mmol/L)적완전배양액작용1h후종지배양.채용TUNEL원위말단표기법검측각조배양해마뇌편조망세포；면역조화염색관찰해마뇌편신경원내pCREB단백적표체변화.결과:(1)간성발작모형조:해마뇌편CA1구발생조망적세포(95.44±14.30)현저다우대조조(41.30±9.30)(P ＜0.05)；pCREB표체(201.36±19.31)교대조조(75.12± 13.71)현저승고(P＜0.05).(2)항pCREB항체간예조:해마뇌편CA1구발생조망적세포(140.88 ±18.32)교간성발작모형조현저증다(P＜0.05)；pCREB표체(172.60±17.68)교대조조현저승고、교모형조현저강저(P＜0.05).결론:(1)간성발작가이증가체외배양해마뇌편신경세포조망발생,가중신경원손상.(2)간성발작후해마뇌편신경세포CREB적린산화증강,조단CREB적린산화가도치신경세포조망가중.
