中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2009年
4期
292-296
,共5页
谢斌%唐春%陈平%苟元斌%肖静%杜虎
謝斌%唐春%陳平%茍元斌%肖靜%杜虎
사빈%당춘%진평%구원빈%초정%두호
癌,肝细胞%X蛋白,肝炎病毒,乙型%原癌蛋白质c-met%启动子%转录因子
癌,肝細胞%X蛋白,肝炎病毒,乙型%原癌蛋白質c-met%啟動子%轉錄因子
암,간세포%X단백,간염병독,을형%원암단백질c-met%계동자%전록인자
Carcinoma,hepatocellular%Hepatitis B virus X protein%Proto-oncogene proteins cmet%Promoter%Transcription factor
目的 明确乙型肝炎X基因(HBx)对c-met基因启动子区的调控及其在肝细胞癌侵袭和转移中的机制.方法 将HBx表达质粒转染HepG2细胞,采用Western blot方法比较转染前后HBx对原癌蛋白质c-met(c-met)表达的影响,进一步将c-met基因启动子区分成5个(包括全部序列)不同长度的片段,然后与PGL3-Basic荧光素酶报告基因系统连接构建成重组质粒,将上述质粒与HBx表达质粒共转染于HepG2细胞中,通过荧光素酶测定、启动子区突变分析及侵袭试验比较转染前后HBx对c-met表达调控的影响.荧光素酶活性值采用ANOVA单因素方差分析,侵袭细胞数统计采用t检验.结果 HBx能够增强c-met的表达;通过对c-met基因启动子区缺失分析,确定了c-met基因启动子区(-183 bp～-100 bp)是HBx作用的调控区域,进一步对该区域可能的转录因子结合位点(SP1-1、SP1-2、AP-2)进行突变分析,发现这3个结合位点均参与了HBx对c-met基因启动子区的调控.测定全部缺失构建体荧光素酶活性结果显示,-184上游部分序列缺失后对HBx的反应有轻微的降低,当-183 bp/-122 bp、-121 bp/-100 bp两个片段缺失后,启动子对HBx的反应均有明显降低,F=40.37,P<0.01;c-met启动子突变分析显示,HBx诱导的荧光素酶活性在SP-1-1、SP-1-2,AP-2突变体组中明显下降,F=235.3,P<0.01.Matrigel侵袭试验检测结果显示,转染pCEP4-X-FLAG表达质粒的HepG2细胞侵袭性增加,穿膜细胞数为(74.33±6.24)个,而未转染组穿膜细胞数为(28.24±3.05)个,t=9.68,P<0.01.结论 HBx引起肝细胞癌的侵袭转移可能是通过对c-met基因启动子区(-183 bp～-100 bp)转录因子SP-1、AP-2结合位点的调控来实现的,但是该过程中所涉及的信号通路仍有待进一步研究.
目的 明確乙型肝炎X基因(HBx)對c-met基因啟動子區的調控及其在肝細胞癌侵襲和轉移中的機製.方法 將HBx錶達質粒轉染HepG2細胞,採用Western blot方法比較轉染前後HBx對原癌蛋白質c-met(c-met)錶達的影響,進一步將c-met基因啟動子區分成5箇(包括全部序列)不同長度的片段,然後與PGL3-Basic熒光素酶報告基因繫統連接構建成重組質粒,將上述質粒與HBx錶達質粒共轉染于HepG2細胞中,通過熒光素酶測定、啟動子區突變分析及侵襲試驗比較轉染前後HBx對c-met錶達調控的影響.熒光素酶活性值採用ANOVA單因素方差分析,侵襲細胞數統計採用t檢驗.結果 HBx能夠增彊c-met的錶達;通過對c-met基因啟動子區缺失分析,確定瞭c-met基因啟動子區(-183 bp～-100 bp)是HBx作用的調控區域,進一步對該區域可能的轉錄因子結閤位點(SP1-1、SP1-2、AP-2)進行突變分析,髮現這3箇結閤位點均參與瞭HBx對c-met基因啟動子區的調控.測定全部缺失構建體熒光素酶活性結果顯示,-184上遊部分序列缺失後對HBx的反應有輕微的降低,噹-183 bp/-122 bp、-121 bp/-100 bp兩箇片段缺失後,啟動子對HBx的反應均有明顯降低,F=40.37,P<0.01;c-met啟動子突變分析顯示,HBx誘導的熒光素酶活性在SP-1-1、SP-1-2,AP-2突變體組中明顯下降,F=235.3,P<0.01.Matrigel侵襲試驗檢測結果顯示,轉染pCEP4-X-FLAG錶達質粒的HepG2細胞侵襲性增加,穿膜細胞數為(74.33±6.24)箇,而未轉染組穿膜細胞數為(28.24±3.05)箇,t=9.68,P<0.01.結論 HBx引起肝細胞癌的侵襲轉移可能是通過對c-met基因啟動子區(-183 bp～-100 bp)轉錄因子SP-1、AP-2結閤位點的調控來實現的,但是該過程中所涉及的信號通路仍有待進一步研究.
목적 명학을형간염X기인(HBx)대c-met기인계동자구적조공급기재간세포암침습화전이중적궤제.방법 장HBx표체질립전염HepG2세포,채용Western blot방법비교전염전후HBx대원암단백질c-met(c-met)표체적영향,진일보장c-met기인계동자구분성5개(포괄전부서렬)불동장도적편단,연후여PGL3-Basic형광소매보고기인계통련접구건성중조질립,장상술질립여HBx표체질립공전염우HepG2세포중,통과형광소매측정、계동자구돌변분석급침습시험비교전염전후HBx대c-met표체조공적영향.형광소매활성치채용ANOVA단인소방차분석,침습세포수통계채용t검험.결과 HBx능구증강c-met적표체;통과대c-met기인계동자구결실분석,학정료c-met기인계동자구(-183 bp～-100 bp)시HBx작용적조공구역,진일보대해구역가능적전록인자결합위점(SP1-1、SP1-2、AP-2)진행돌변분석,발현저3개결합위점균삼여료HBx대c-met기인계동자구적조공.측정전부결실구건체형광소매활성결과현시,-184상유부분서렬결실후대HBx적반응유경미적강저,당-183 bp/-122 bp、-121 bp/-100 bp량개편단결실후,계동자대HBx적반응균유명현강저,F=40.37,P<0.01;c-met계동자돌변분석현시,HBx유도적형광소매활성재SP-1-1、SP-1-2,AP-2돌변체조중명현하강,F=235.3,P<0.01.Matrigel침습시험검측결과현시,전염pCEP4-X-FLAG표체질립적HepG2세포침습성증가,천막세포수위(74.33±6.24)개,이미전염조천막세포수위(28.24±3.05)개,t=9.68,P<0.01.결론 HBx인기간세포암적침습전이가능시통과대c-met기인계동자구(-183 bp～-100 bp)전록인자SP-1、AP-2결합위점적조공래실현적,단시해과정중소섭급적신호통로잉유대진일보연구.
Objective To confirm the effect of hepatitis B virus X (HBx) protein on the c-met promoter activity in HepG2 cells. Method The expression of c-met protein was detected by western blot in HBx-transfected HepG2 cells, the human c-met promote activity was checked by luciferase assay using five different constructs with deletion or point mutation. Results HBx protein stimulated the expression of the c-met in HepG2 cells. The enhanced expression of c-met in HBx-transfected cells was mediated by the activation of AP-2 and SP-1 transcriptional activity at the c-met promoter region (-183bp~100bp), HBx increased the invasiveness of HepG2 cells as determined by Matrigel invasion assay. Conclusion These results suggests that HBx induces the expression of c-met through the activation of AP-2 and SP-1 activity at the promoter region; in addition, our data indicate that HBx stimulates the invasive potential of HepG2 cells.
