中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2004年
1期
54-58
,共5页
白雪源%车凤翔%陈香美%孟令英%周煜
白雪源%車鳳翔%陳香美%孟令英%週煜
백설원%차봉상%진향미%맹령영%주욱
腺病毒科%遗传体%重组,遗传%衰老%基因表达
腺病毒科%遺傳體%重組,遺傳%衰老%基因錶達
선병독과%유전체%중조,유전%쇠로%기인표체
目的构建E1区缺失的复制缺陷型5型重组腺病毒载体,探讨p16INK4a基因对肺癌细胞株A549细胞增殖与衰老的影响.方法通过脂质体介导,将pAdCMV-p16INK4a与pJM17共转染人5型腺病毒E1基因转化的人胚肾细胞系293细胞,同源重组产生腺病毒空斑,用双重PCR筛选出携带p16INK4a基因的重组腺病毒并感染肺癌细胞A549,用免疫组化及Western blot检测腺病毒载体介导的基因转移效率和蛋白表达水平,分别用X-gal染色和TRAP-ELISA检测A549细胞中衰老相关β-半乳糖苷酶及端粒酶活性.结果腺病毒载体可将95%以上的p16INK4a基因转移到A549中,受感染细胞有外源p16INK4a蛋白表达,其生长受到明显抑制,即p16INK4a基因能诱导A549细胞表达衰老相关β-半乳糖苷酶,并抑制细胞中的端粒酶活性.结论复制缺陷型重组腺病毒,能有效地介导外源基因的转移与表达,可用于基因免疫和基因治疗;p16INK4a基因能抑制肺癌细胞A549生长并诱导其发生复制性衰老.
目的構建E1區缺失的複製缺陷型5型重組腺病毒載體,探討p16INK4a基因對肺癌細胞株A549細胞增殖與衰老的影響.方法通過脂質體介導,將pAdCMV-p16INK4a與pJM17共轉染人5型腺病毒E1基因轉化的人胚腎細胞繫293細胞,同源重組產生腺病毒空斑,用雙重PCR篩選齣攜帶p16INK4a基因的重組腺病毒併感染肺癌細胞A549,用免疫組化及Western blot檢測腺病毒載體介導的基因轉移效率和蛋白錶達水平,分彆用X-gal染色和TRAP-ELISA檢測A549細胞中衰老相關β-半乳糖苷酶及耑粒酶活性.結果腺病毒載體可將95%以上的p16INK4a基因轉移到A549中,受感染細胞有外源p16INK4a蛋白錶達,其生長受到明顯抑製,即p16INK4a基因能誘導A549細胞錶達衰老相關β-半乳糖苷酶,併抑製細胞中的耑粒酶活性.結論複製缺陷型重組腺病毒,能有效地介導外源基因的轉移與錶達,可用于基因免疫和基因治療;p16INK4a基因能抑製肺癌細胞A549生長併誘導其髮生複製性衰老.
목적구건E1구결실적복제결함형5형중조선병독재체,탐토p16INK4a기인대폐암세포주A549세포증식여쇠로적영향.방법통과지질체개도,장pAdCMV-p16INK4a여pJM17공전염인5형선병독E1기인전화적인배신세포계293세포,동원중조산생선병독공반,용쌍중PCR사선출휴대p16INK4a기인적중조선병독병감염폐암세포A549,용면역조화급Western blot검측선병독재체개도적기인전이효솔화단백표체수평,분별용X-gal염색화TRAP-ELISA검측A549세포중쇠로상관β-반유당감매급단립매활성.결과선병독재체가장95%이상적p16INK4a기인전이도A549중,수감염세포유외원p16INK4a단백표체,기생장수도명현억제,즉p16INK4a기인능유도A549세포표체쇠로상관β-반유당감매,병억제세포중적단립매활성.결론복제결함형중조선병독,능유효지개도외원기인적전이여표체,가용우기인면역화기인치료;p16INK4a기인능억제폐암세포A549생장병유도기발생복제성쇠로.
