中华麻醉学杂志
中華痳醉學雜誌
중화마취학잡지
CHINESE JOURNAL OF ANESTHESIOLOGY
2006年
11期
1001-1004
,共4页
杨昭云%徐军美%姜金玉%郭亮%廖用琼%钱其军
楊昭雲%徐軍美%薑金玉%郭亮%廖用瓊%錢其軍
양소운%서군미%강금옥%곽량%료용경%전기군
白细胞介素10%基因,bcl-2%腺病毒科%心肌%转染%冠状血管
白細胞介素10%基因,bcl-2%腺病毒科%心肌%轉染%冠狀血管
백세포개소10%기인,bcl-2%선병독과%심기%전염%관상혈관
目的 研究人白细胞介素-10(IL-10)、Bcl-2基因重组腺病毒经冠状动脉转染大鼠心肌的可行性.方法 以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2,在293细胞内分别扩增,应用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒.105只雄性SD大鼠,随机分为5组:Ad-EGFP组(Ⅰ组,n=5)、PBS对照组(Ⅱ组,n=25)、Ad-hBcl-2组(Ⅲ组,n=25)、Ad-hIL-10组(Ⅳ组,n=25)、Ad-hIL-10+Ad-hBcl-2组(Ⅴ组,n=25).采用左心室腔注射,同时阻断主动脉、肺动脉10 s的方法来实施冠状动脉转染.Ⅰ组于转染后3 d处死大鼠,取心、肝、肺、肾、脑,作快速冰冻切片,光镜下观察绿色荧光蛋白(EGFP)表达情况.其余各组于转染后1、3、7、14、28 d各随机处死5只大鼠,用ELISA法测定静脉血浆及心肌组织IL-10、Bcl-2表达水平;取心、肝、肺、肾组织,光镜下观察炎性反应;测定血常规、肝功能指标、肾功能指标及心肌酶.结果 Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2经氯化铯纯化滴度分别为1.99×109、2.10×1010、1.70×1010 pfu/ml.Ⅰ组于转染后3 d心肌组织可见大量EGFP表达,其它器官未检测到EGFP的表达.Ⅲ组～Ⅴ组心肌组织目的基因蛋白含量于转染后3 d达高峰,并持续至转染后14 d,Ⅲ组、Ⅴ组心肌组织Bcl-2峰含量分别为(71.6±17.9)×104、(95.5±25.7)×104 pg/g,Ⅳ组、Ⅴ组心肌组织IL-10峰含量分别为(16.8±3.7)×104、(19.3±3.3)×104 pg/g,Ⅲ组～Ⅴ组转染后1～14 d心肌组织目的基因蛋白含量均高于Ⅱ组,Ⅴ组转染后3d心肌组织目的基因蛋白含量高于Ⅲ组、Ⅳ组(P＜0.05).Ⅲ组～Ⅴ组血浆IL-10、Bcl-2浓度与Ⅱ组比较差异无统计学意义.光镜下各组心、肝、肺、肾组织未见明显炎症反应.与Ⅱ组比较,Ⅲ组～Ⅴ组血常规、肝功能指标、肾功能指标、心肌酶差异无统计学意义.结论 重组腺病毒介导人IL-10、Bcl-2基因经冠状动脉转染大鼠后,心肌能够高效地表达目的基因蛋白,且局限在心肌内,没有产生炎性反应和免疫反应.
目的 研究人白細胞介素-10(IL-10)、Bcl-2基因重組腺病毒經冠狀動脈轉染大鼠心肌的可行性.方法 以細胞內同源重組法構建複製缺陷型重組腺病毒Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2,在293細胞內分彆擴增,應用氯化銫密度梯度離心法純化病毒.105隻雄性SD大鼠,隨機分為5組:Ad-EGFP組(Ⅰ組,n=5)、PBS對照組(Ⅱ組,n=25)、Ad-hBcl-2組(Ⅲ組,n=25)、Ad-hIL-10組(Ⅳ組,n=25)、Ad-hIL-10+Ad-hBcl-2組(Ⅴ組,n=25).採用左心室腔註射,同時阻斷主動脈、肺動脈10 s的方法來實施冠狀動脈轉染.Ⅰ組于轉染後3 d處死大鼠,取心、肝、肺、腎、腦,作快速冰凍切片,光鏡下觀察綠色熒光蛋白(EGFP)錶達情況.其餘各組于轉染後1、3、7、14、28 d各隨機處死5隻大鼠,用ELISA法測定靜脈血漿及心肌組織IL-10、Bcl-2錶達水平;取心、肝、肺、腎組織,光鏡下觀察炎性反應;測定血常規、肝功能指標、腎功能指標及心肌酶.結果 Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2經氯化銫純化滴度分彆為1.99×109、2.10×1010、1.70×1010 pfu/ml.Ⅰ組于轉染後3 d心肌組織可見大量EGFP錶達,其它器官未檢測到EGFP的錶達.Ⅲ組～Ⅴ組心肌組織目的基因蛋白含量于轉染後3 d達高峰,併持續至轉染後14 d,Ⅲ組、Ⅴ組心肌組織Bcl-2峰含量分彆為(71.6±17.9)×104、(95.5±25.7)×104 pg/g,Ⅳ組、Ⅴ組心肌組織IL-10峰含量分彆為(16.8±3.7)×104、(19.3±3.3)×104 pg/g,Ⅲ組～Ⅴ組轉染後1～14 d心肌組織目的基因蛋白含量均高于Ⅱ組,Ⅴ組轉染後3d心肌組織目的基因蛋白含量高于Ⅲ組、Ⅳ組(P＜0.05).Ⅲ組～Ⅴ組血漿IL-10、Bcl-2濃度與Ⅱ組比較差異無統計學意義.光鏡下各組心、肝、肺、腎組織未見明顯炎癥反應.與Ⅱ組比較,Ⅲ組～Ⅴ組血常規、肝功能指標、腎功能指標、心肌酶差異無統計學意義.結論 重組腺病毒介導人IL-10、Bcl-2基因經冠狀動脈轉染大鼠後,心肌能夠高效地錶達目的基因蛋白,且跼限在心肌內,沒有產生炎性反應和免疫反應.
목적 연구인백세포개소-10(IL-10)、Bcl-2기인중조선병독경관상동맥전염대서심기적가행성.방법 이세포내동원중조법구건복제결함형중조선병독Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2,재293세포내분별확증,응용록화색밀도제도리심법순화병독.105지웅성SD대서,수궤분위5조:Ad-EGFP조(Ⅰ조,n=5)、PBS대조조(Ⅱ조,n=25)、Ad-hBcl-2조(Ⅲ조,n=25)、Ad-hIL-10조(Ⅳ조,n=25)、Ad-hIL-10+Ad-hBcl-2조(Ⅴ조,n=25).채용좌심실강주사,동시조단주동맥、폐동맥10 s적방법래실시관상동맥전염.Ⅰ조우전염후3 d처사대서,취심、간、폐、신、뇌,작쾌속빙동절편,광경하관찰록색형광단백(EGFP)표체정황.기여각조우전염후1、3、7、14、28 d각수궤처사5지대서,용ELISA법측정정맥혈장급심기조직IL-10、Bcl-2표체수평;취심、간、폐、신조직,광경하관찰염성반응;측정혈상규、간공능지표、신공능지표급심기매.결과 Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2경록화색순화적도분별위1.99×109、2.10×1010、1.70×1010 pfu/ml.Ⅰ조우전염후3 d심기조직가견대량EGFP표체,기타기관미검측도EGFP적표체.Ⅲ조～Ⅴ조심기조직목적기인단백함량우전염후3 d체고봉,병지속지전염후14 d,Ⅲ조、Ⅴ조심기조직Bcl-2봉함량분별위(71.6±17.9)×104、(95.5±25.7)×104 pg/g,Ⅳ조、Ⅴ조심기조직IL-10봉함량분별위(16.8±3.7)×104、(19.3±3.3)×104 pg/g,Ⅲ조～Ⅴ조전염후1～14 d심기조직목적기인단백함량균고우Ⅱ조,Ⅴ조전염후3d심기조직목적기인단백함량고우Ⅲ조、Ⅳ조(P＜0.05).Ⅲ조～Ⅴ조혈장IL-10、Bcl-2농도여Ⅱ조비교차이무통계학의의.광경하각조심、간、폐、신조직미견명현염증반응.여Ⅱ조비교,Ⅲ조～Ⅴ조혈상규、간공능지표、신공능지표、심기매차이무통계학의의.결론 중조선병독개도인IL-10、Bcl-2기인경관상동맥전염대서후,심기능구고효지표체목적기인단백,차국한재심기내,몰유산생염성반응화면역반응.
