CAJ | 학술논문

目的:探讨RNA干扰沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi a-mannosidase Ⅱ,GM Ⅱ)基因表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响.方法:为沉默GM Ⅱ基因,构建了4个分别针对不同靶位点的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,同时合成阴性对照质粒表达载体.应用LipofectAMINE2000将质粒转染入BGC-823细胞.分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后GM Ⅱ mRNA和蛋白表达的变化,选出沉默效果最佳的质粒.应用Transwell侵袭实验和划痕损伤实验分别检测GM Ⅱ基因沉默对人胃癌细胞BGC-823侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Nco-1303沉默GM Ⅱ基因的效果最好.转染pGPU6/GFP/Neo-1303组穿透小室基质的细胞数明显少于空白对照组和转染阴性对照组(P＜0.05).无血清培养液培养24 h后,转染pGPU6/GFP/Neo-1303组细胞的迁移能力较空白对照组和转染阴性对照组明显降低(P＜0.05).结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌BGC-823细胞中GMⅡmRNA和蛋白的表达,从而抑制BGC-823细胞的侵袭和迁移能力.GM Ⅱ可能成为胃癌治疗的新靶点之一.
목적:탐토RNA간우침묵고이기체α-감로당감매Ⅱ(Golgi a-mannosidase Ⅱ,GM Ⅱ)기인표체대인위암BGC-823세포침습화천이적영향.방법:위침묵GM Ⅱ기인,구건료4개분별침대불동파위점적단발협RNA (short hairpin RNA,shRNA)질립표체재체,동시합성음성대조질립표체재체.응용LipofectAMINE2000장질립전염입BGC-823세포.분별채용RT-PCR화단백질인적법검측전염후GM Ⅱ mRNA화단백표체적변화,선출침묵효과최가적질립.응용Transwell침습실험화화흔손상실험분별검측GM Ⅱ기인침묵대인위암세포BGC-823침습화천이능력적영향.결과:질립재체pGPU6/GFP/Nco-1303침묵GM Ⅱ기인적효과최호.전염pGPU6/GFP/Neo-1303조천투소실기질적세포수명현소우공백대조조화전염음성대조조(P＜0.05).무혈청배양액배양24 h후,전염pGPU6/GFP/Neo-1303조세포적천이능력교공백대조조화전염음성대조조명현강저(P＜0.05).결론:RNA간우기술가침묵인위암BGC-823세포중GMⅡmRNA화단백적표체,종이억제BGC-823세포적침습화천이능력.GM Ⅱ가능성위위암치료적신파점지일.