柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M20的克隆与表达
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CLONING AND EXPRESSION OF M20RELATED TO EIMERIA TENELLA DRUG-RESISTANCE
  • 万方数据
    中国动物传染病学报 중국동물전염병학보
    CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
    2011年 1期 62-67 ,共6页

    程军%董辉%郭涛%韩红玉%姜连连%赵其平%朱顺海%马卫娇%曾艳波%孔春林%李婷%黄兵

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    柔嫩艾美耳球虫%抗药性%地克珠利%马杜拉霉素%实时荧光定量PCR 柔嫩艾美耳毬蟲%抗藥性%地剋珠利%馬杜拉黴素%實時熒光定量PCR
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    利用前期构建的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株与各自母株之间的抑制性消减文库而获得的ESTs序列,选择其中一个差异表达的EST序列(克隆号为M20),采用RACE技术,以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA为模板,扩增获得了该基因的全长cDNA序列,命名为M20,该基因全长847bp,包括一个525 bp的开放阅读框,编码174个氨基酸,预测理论分子量约为19 ku.实时荧光定量PCR结果显示,该基因在敏感株中表达量高于地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株;在不同发育阶段中,未孢子化卵囊表达量高于孢子化卵囊、子孢子以及裂殖子阶段虫体.将该基因克隆于原核表达质粒pET28b中,构建重组质粒pET28b-M20,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达获得了重组蛋白,分子量约约为23 ku,该蛋白以包涵体形式存在,在IPTG诱导8 h后表达稳定,Western blot检测表明,其具有较好的免疫原性.
    이용전기구건적유눈애미이구충(Eimeria tenella)지극주리항약주화마두랍매소항약주여각자모주지간적억제성소감문고이획득적ESTs서렬,선택기중일개차이표체적EST서렬(극륭호위M20),채용RACE기술,이유눈애미이구충민감주포자화란낭cDNA위모판,확증획득료해기인적전장cDNA서렬,명명위M20,해기인전장847bp,포괄일개525 bp적개방열독광,편마174개안기산,예측이론분자량약위19 ku.실시형광정량PCR결과현시,해기인재민감주중표체량고우지극주리항약주화마두랍매소항약주;재불동발육계단중,미포자화란낭표체량고우포자화란낭、자포자이급렬식자계단충체.장해기인극륭우원핵표체질립pET28b중,구건중조질립pET28b-M20,전화대장간균BL21(DE3)후,경IPTG유도표체획득료중조단백,분자량약약위23 ku,해단백이포함체형식존재,재IPTG유도8 h후표체은정,Western blot검측표명,기구유교호적면역원성.
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