实验与检验医学
實驗與檢驗醫學
실험여검험의학
EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE
2011年
2期
102-104,124
,共4页
黄敏%欧东梅%徐金环%张晓梅%张义成
黃敏%歐東梅%徐金環%張曉梅%張義成
황민%구동매%서금배%장효매%장의성
Cfi1%SYBR GreenI%实时荧光定量PCR
Cfi1%SYBR GreenI%實時熒光定量PCR
Cfi1%SYBR GreenI%실시형광정량PCR
目的 建立测定人类Gfi1mRNA表达量的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,为进一步研究新基因的功能奠定基础.方法 以Gfi1基因为靶基因设计引物.构建携带GficDNA的质粒plox-Gfi1,经过纯化,质粒浓度测定,拷贝数的计算及10倍的梯度稀释制备标准品.应用ABI stepone PCR仪对Cfi1mRNA进行实时荧光定量PCR检测,建立标准曲线和熔解曲线.结果 建立了Cfi1mRNA表达的实时荧光定量PCR方法,本法线性范围为6.36×102～6.36×108copies/μl,线性相关系数y2为0.996,熔解曲线为单峰,Tm值为(89.98±0.22)℃,标准品的循环阈值批内变异系数和批间变异系数分别为1.35%～3.61%和1.49%～3.42%.结论 本研究建立的Gfi1mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法速度快,灵敏度高,特异性强,重复性及稳定性好,可用于Gfi1基因的定量检测.
目的 建立測定人類Gfi1mRNA錶達量的SYBR Green I實時熒光定量PCR方法,為進一步研究新基因的功能奠定基礎.方法 以Gfi1基因為靶基因設計引物.構建攜帶GficDNA的質粒plox-Gfi1,經過純化,質粒濃度測定,拷貝數的計算及10倍的梯度稀釋製備標準品.應用ABI stepone PCR儀對Cfi1mRNA進行實時熒光定量PCR檢測,建立標準麯線和鎔解麯線.結果 建立瞭Cfi1mRNA錶達的實時熒光定量PCR方法,本法線性範圍為6.36×102～6.36×108copies/μl,線性相關繫數y2為0.996,鎔解麯線為單峰,Tm值為(89.98±0.22)℃,標準品的循環閾值批內變異繫數和批間變異繫數分彆為1.35%～3.61%和1.49%～3.42%.結論 本研究建立的Gfi1mRNA錶達實時熒光定量PCR檢測方法速度快,靈敏度高,特異性彊,重複性及穩定性好,可用于Gfi1基因的定量檢測.
목적 건립측정인류Gfi1mRNA표체량적SYBR Green I실시형광정량PCR방법,위진일보연구신기인적공능전정기출.방법 이Gfi1기인위파기인설계인물.구건휴대GficDNA적질립plox-Gfi1,경과순화,질립농도측정,고패수적계산급10배적제도희석제비표준품.응용ABI stepone PCR의대Cfi1mRNA진행실시형광정량PCR검측,건립표준곡선화용해곡선.결과 건립료Cfi1mRNA표체적실시형광정량PCR방법,본법선성범위위6.36×102～6.36×108copies/μl,선성상관계수y2위0.996,용해곡선위단봉,Tm치위(89.98±0.22)℃,표준품적순배역치비내변이계수화비간변이계수분별위1.35%～3.61%화1.49%～3.42%.결론 본연구건립적Gfi1mRNA표체실시형광정량PCR검측방법속도쾌,령민도고,특이성강,중복성급은정성호,가용우Gfi1기인적정량검측.
