天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2010年
8期
689-692
,共4页
刘瑞%戴晨琳%郑纺%郭善一%王宝利%邱明才
劉瑞%戴晨琳%鄭紡%郭善一%王寶利%邱明纔
류서%대신림%정방%곽선일%왕보리%구명재
破骨细胞%外源凝集素类%重组蛋白质类%大肠杆菌%巨噬细胞集落刺激因子%核因子κB受体活化因子%配体%骨髓细胞%小鼠
破骨細胞%外源凝集素類%重組蛋白質類%大腸桿菌%巨噬細胞集落刺激因子%覈因子κB受體活化因子%配體%骨髓細胞%小鼠
파골세포%외원응집소류%중조단백질류%대장간균%거서세포집락자격인자%핵인자κB수체활화인자%배체%골수세포%소서
目的:在大肠杆菌中表达人破骨细胞抑制性凝集素(OCIL)胞外段重组蛋白,体外检测表达的重组蛋白活性.方法:通过修改OCIL胞外段编码的碱基序列和重组PCR方法得到连续DNA片段;将表达载体pMAL-c2x/hOCIL转化入BL21(DE3)plysS宿主菌,IPTG诱导表达.利用直链淀粉亲和层析柱分离纯化,Western blotting鉴定重组蛋白.体外培养小鼠股骨骨髓细胞,在巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导骨髓细胞向破骨细胞分化的基础上,加入不同浓度的重组蛋白,观察其对破骨细胞样细胞生成的影响.结果:重组菌中确有融合蛋白MBP-hOCIL表达,其中目的蛋白占纯化液总蛋白的91.36%,纯化后重组融合蛋白产率为24.3 mg/L培养基;所制备的重组蛋白对小鼠骨髓破骨细胞样细胞的形成有抑制作用.结论:本研究通过基因工程的方法成功获得了hOCIL胞外段重组蛋白,此蛋白在体外可以明显抑制破骨细胞样细胞的形成.
目的:在大腸桿菌中錶達人破骨細胞抑製性凝集素(OCIL)胞外段重組蛋白,體外檢測錶達的重組蛋白活性.方法:通過脩改OCIL胞外段編碼的堿基序列和重組PCR方法得到連續DNA片段;將錶達載體pMAL-c2x/hOCIL轉化入BL21(DE3)plysS宿主菌,IPTG誘導錶達.利用直鏈澱粉親和層析柱分離純化,Western blotting鑒定重組蛋白.體外培養小鼠股骨骨髓細胞,在巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)和覈因子κB受體活化因子配基(RANKL)誘導骨髓細胞嚮破骨細胞分化的基礎上,加入不同濃度的重組蛋白,觀察其對破骨細胞樣細胞生成的影響.結果:重組菌中確有融閤蛋白MBP-hOCIL錶達,其中目的蛋白佔純化液總蛋白的91.36%,純化後重組融閤蛋白產率為24.3 mg/L培養基;所製備的重組蛋白對小鼠骨髓破骨細胞樣細胞的形成有抑製作用.結論:本研究通過基因工程的方法成功穫得瞭hOCIL胞外段重組蛋白,此蛋白在體外可以明顯抑製破骨細胞樣細胞的形成.
목적:재대장간균중표체인파골세포억제성응집소(OCIL)포외단중조단백,체외검측표체적중조단백활성.방법:통과수개OCIL포외단편마적감기서렬화중조PCR방법득도련속DNA편단;장표체재체pMAL-c2x/hOCIL전화입BL21(DE3)plysS숙주균,IPTG유도표체.이용직련정분친화층석주분리순화,Western blotting감정중조단백.체외배양소서고골골수세포,재거서세포집락자격인자(M-CSF)화핵인자κB수체활화인자배기(RANKL)유도골수세포향파골세포분화적기출상,가입불동농도적중조단백,관찰기대파골세포양세포생성적영향.결과:중조균중학유융합단백MBP-hOCIL표체,기중목적단백점순화액총단백적91.36%,순화후중조융합단백산솔위24.3 mg/L배양기;소제비적중조단백대소서골수파골세포양세포적형성유억제작용.결론:본연구통과기인공정적방법성공획득료hOCIL포외단중조단백,차단백재체외가이명현억제파골세포양세포적형성.
