重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2010年
6期
805-809
,共5页
段雯%李伟%靳红卫%夏铸%程训官%张昕宇%郑小红%余瑜
段雯%李偉%靳紅衛%夏鑄%程訓官%張昕宇%鄭小紅%餘瑜
단문%리위%근홍위%하주%정훈관%장흔우%정소홍%여유
脂代谢%靶点蛋白%hPPARγ-LBD%抗肿瘤药物%药物筛选模型%罗格列酮%德氮吡格
脂代謝%靶點蛋白%hPPARγ-LBD%抗腫瘤藥物%藥物篩選模型%囉格列酮%德氮吡格
지대사%파점단백%hPPARγ-LBD%항종류약물%약물사선모형%라격렬동%덕담필격
目的:建立一种以脂代谢靶点蛋白hPPAR γ-LBD重组蛋白进行抗肿瘤药物筛选的方法.方法:采用pReceiver-B01-PPARγ-LBD表达质粒转至E.coli BL21(DE3)细胞,进行表达与纯化得到可溶性靶点蛋白hPPARγ-LBD重组蛋白,以罗格列酮为hPPARγ-LBD的阳性配体,以GW9662作拮抗剂,采用分子排阻色谱-高效液相色谱法(SEC-HPLC)测定hPPARγ-LBD重组蛋白与配体药物的结合活性.结果:在优化条件(16℃、0.6mmol/LIPTG、诱导20 h)下,能可溶性表达hPPARγ-LBD重组蛋白;经镍亲和色谱纯化后,以每升LB培养基计可获得41 mg、纯度为95%的hPPARγ-LBD重组蛋白;该重组蛋白与罗格列酮特异性结合率约65%,Kd值为625 nmol/L;与德氮吡格(Tetrazanbigen,TNBG)特异性结合率约60%,Kd值为1 000nmol/L.结论:本文基于脂代谢靶点蛋白hPPARγ-LBD建立了抗肿瘤药物体外筛选模型的方法,该方法快速、稳定、安全及简便,能应用于抗肿瘤药物的筛选.
目的:建立一種以脂代謝靶點蛋白hPPAR γ-LBD重組蛋白進行抗腫瘤藥物篩選的方法.方法:採用pReceiver-B01-PPARγ-LBD錶達質粒轉至E.coli BL21(DE3)細胞,進行錶達與純化得到可溶性靶點蛋白hPPARγ-LBD重組蛋白,以囉格列酮為hPPARγ-LBD的暘性配體,以GW9662作拮抗劑,採用分子排阻色譜-高效液相色譜法(SEC-HPLC)測定hPPARγ-LBD重組蛋白與配體藥物的結閤活性.結果:在優化條件(16℃、0.6mmol/LIPTG、誘導20 h)下,能可溶性錶達hPPARγ-LBD重組蛋白;經鎳親和色譜純化後,以每升LB培養基計可穫得41 mg、純度為95%的hPPARγ-LBD重組蛋白;該重組蛋白與囉格列酮特異性結閤率約65%,Kd值為625 nmol/L;與德氮吡格(Tetrazanbigen,TNBG)特異性結閤率約60%,Kd值為1 000nmol/L.結論:本文基于脂代謝靶點蛋白hPPARγ-LBD建立瞭抗腫瘤藥物體外篩選模型的方法,該方法快速、穩定、安全及簡便,能應用于抗腫瘤藥物的篩選.
목적:건립일충이지대사파점단백hPPAR γ-LBD중조단백진행항종류약물사선적방법.방법:채용pReceiver-B01-PPARγ-LBD표체질립전지E.coli BL21(DE3)세포,진행표체여순화득도가용성파점단백hPPARγ-LBD중조단백,이라격렬동위hPPARγ-LBD적양성배체,이GW9662작길항제,채용분자배조색보-고효액상색보법(SEC-HPLC)측정hPPARγ-LBD중조단백여배체약물적결합활성.결과:재우화조건(16℃、0.6mmol/LIPTG、유도20 h)하,능가용성표체hPPARγ-LBD중조단백;경얼친화색보순화후,이매승LB배양기계가획득41 mg、순도위95%적hPPARγ-LBD중조단백;해중조단백여라격렬동특이성결합솔약65%,Kd치위625 nmol/L;여덕담필격(Tetrazanbigen,TNBG)특이성결합솔약60%,Kd치위1 000nmol/L.결론:본문기우지대사파점단백hPPARγ-LBD건립료항종류약물체외사선모형적방법,해방법쾌속、은정、안전급간편,능응용우항종류약물적사선.
