中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2008年
6期
432-437
,共6页
周晓红%黄小琴%钟任佳%朱巧珍%赵莹%郭瑜琪%陈晓光
週曉紅%黃小琴%鐘任佳%硃巧珍%趙瑩%郭瑜琪%陳曉光
주효홍%황소금%종임가%주교진%조형%곽유기%진효광
刚地弓形虫%多表位抗原基因%转基因番茄%表达
剛地弓形蟲%多錶位抗原基因%轉基因番茄%錶達
강지궁형충%다표위항원기인%전기인번가%표체
目的 获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因(Tg-MAG)的转基因番茄植株.方法 用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG,以农杆菌介导的T-DNA转化法转化番茄子叶和下胚轴;经芽诱导、伸长以及生根的连续性抗性筛选和培育,获得Tg-MAG转基因番茄植株,练苗后移栽花盆中培育至开花、结果.用PCR、RT-PCR、蛋白质印迹(Westem blotting)分别对Tg-MAG转基因植株进行DNA、RNA、蛋白水平的鉴定.结果 获得的Tg-MAG转基因番茄植株经PCR和RT-PCR鉴定,得到预期360 bp的Tg-MAG片段,经Western blotting筛选获得能正确表达预期相对分子质量(胁)为11 900的Tg-MAG重组蛋白,且8株具有免疫反应性,其中有2株于番茄果实巾所表达的重组蛋白能与抗弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)单克隆抗体KTH,发生强免疫反应.结论 获得Tg-MAG转基因番茄株系,在其果实中成功表达具有良好免疫反应性的Tg-MAG重组蛋白.
目的 穫得穩定錶達弓形蟲多錶位抗原基因(Tg-MAG)的轉基因番茄植株.方法 用植物組成型啟動子E35S、番茄果實特異性E82.2啟動子以及E35S-E81.1複閤式啟動子驅動弓形蟲Tg-MAG的植物錶達載體pC35MG、pCE2MG與pC35E1MG,以農桿菌介導的T-DNA轉化法轉化番茄子葉和下胚軸;經芽誘導、伸長以及生根的連續性抗性篩選和培育,穫得Tg-MAG轉基因番茄植株,練苗後移栽花盆中培育至開花、結果.用PCR、RT-PCR、蛋白質印跡(Westem blotting)分彆對Tg-MAG轉基因植株進行DNA、RNA、蛋白水平的鑒定.結果 穫得的Tg-MAG轉基因番茄植株經PCR和RT-PCR鑒定,得到預期360 bp的Tg-MAG片段,經Western blotting篩選穫得能正確錶達預期相對分子質量(脅)為11 900的Tg-MAG重組蛋白,且8株具有免疫反應性,其中有2株于番茄果實巾所錶達的重組蛋白能與抗弓形蟲速殖子主要錶麵抗原1(SAG1)單剋隆抗體KTH,髮生彊免疫反應.結論 穫得Tg-MAG轉基因番茄株繫,在其果實中成功錶達具有良好免疫反應性的Tg-MAG重組蛋白.
목적 획득은정표체궁형충다표위항원기인(Tg-MAG)적전기인번가식주.방법 용식물조성형계동자E35S、번가과실특이성E82.2계동자이급E35S-E81.1복합식계동자구동궁형충Tg-MAG적식물표체재체pC35MG、pCE2MG여pC35E1MG,이농간균개도적T-DNA전화법전화번가자협화하배축;경아유도、신장이급생근적련속성항성사선화배육,획득Tg-MAG전기인번가식주,련묘후이재화분중배육지개화、결과.용PCR、RT-PCR、단백질인적(Westem blotting)분별대Tg-MAG전기인식주진행DNA、RNA、단백수평적감정.결과 획득적Tg-MAG전기인번가식주경PCR화RT-PCR감정,득도예기360 bp적Tg-MAG편단,경Western blotting사선획득능정학표체예기상대분자질량(협)위11 900적Tg-MAG중조단백,차8주구유면역반응성,기중유2주우번가과실건소표체적중조단백능여항궁형충속식자주요표면항원1(SAG1)단극륭항체KTH,발생강면역반응.결론 획득Tg-MAG전기인번가주계,재기과실중성공표체구유량호면역반응성적Tg-MAG중조단백.
