CAJ | 학술논문

目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株.方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS.用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况.结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性.结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS.筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台.
목적:구건인선립체항병독신호단백(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)적소간우RNA진핵표체질립,병사선출은정간우MAVS적세포주.방법:근거문헌보도적서렬화재체적점성말단,설계합성2조침대MAVS적DNA서렬,퇴화후련접도재체pSUPER.retro.neo+gfp상,경측서분석정학후,질립명명위psiMAVS.용지질체전염질립도MCF-7세포중,경G418가압사선은정표체MAVS소간우RNA적세포주,용면역인적검측세포중MAVS적표체정황,장간우효과호적세포주명명위MCF-7/siMAVS,재용형광소매시험검측MCF-7/siMAVS세포대외원MAVS혹poly(dA-dT)유도간우소-β(IFN-β)전록적정황.결과:면역인적결과증실건립적은정세포주MCF-7/siMAVS능구유효간우MAVS적표체,병재외원MAVS혹poly(dA-dT)존재적정황하,억제IFN-β적전록활성.결론:구건료표체MAVS소간우RNA적질립psiMAVS.사선출은정간우MAVS표체적세포주MCF-7/siMAVS,위심입연구MAVS재선천면역중적작용제공료평태.