中国肿瘤临床
中國腫瘤臨床
중국종류림상
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY
2008年
21期
1244-1248
,共5页
康楷%胡丽娜%董晓静%朱元方
康楷%鬍麗娜%董曉靜%硃元方
강해%호려나%동효정%주원방
RNA干扰%CXCR4%逆转录病毒%宫颈癌%Caski细胞
RNA榦擾%CXCR4%逆轉錄病毒%宮頸癌%Caski細胞
RNA간우%CXCR4%역전록병독%궁경암%Caski세포
目的:构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用.方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体质粒pSOS,测序正确后进行重组,转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清用其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测其对Caski细胞CXCR4表达的抑制作用.结果:成功构建pSOS-siCXCR4逆转录病毒载体,筛选出高效抑制序列,与对照组比较,在Caski细胞的mRNA水平,CXCR4-siRNA在24h、48h和72h对CXCR4 mRNA表达的抑制率分别为29.9%、56.8%和62.8%,而在蛋白水平对CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%、49.6%和62.9%.结论:pSOS-HUS-siCXCR4干扰载体可以有效抑制Caski细胞中CXCR4表达.
目的:構建針對趨化因子受體CXCR4的RNA榦擾逆轉錄病毒載體,檢測由逆轉錄病毒介導的RNA榦擾對人宮頸癌Caski細胞CXCR4基因錶達的抑製作用.方法:人工閤成CXCR4特異性小榦擾RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,將其插入帶有綠色熒光蛋白(EGFP)的逆轉錄病毒載體質粒pSOS,測序正確後進行重組,轉染PT67細胞包裝成病毒,收穫病毒上清用其轉染Caski細胞,採用實時定量PCR和Western blot分彆從mRNA水平和蛋白水平檢測其對Caski細胞CXCR4錶達的抑製作用.結果:成功構建pSOS-siCXCR4逆轉錄病毒載體,篩選齣高效抑製序列,與對照組比較,在Caski細胞的mRNA水平,CXCR4-siRNA在24h、48h和72h對CXCR4 mRNA錶達的抑製率分彆為29.9%、56.8%和62.8%,而在蛋白水平對CXCR4蛋白的抑製率分彆為43.6%、49.6%和62.9%.結論:pSOS-HUS-siCXCR4榦擾載體可以有效抑製Caski細胞中CXCR4錶達.
목적:구건침대추화인자수체CXCR4적RNA간우역전록병독재체,검측유역전록병독개도적RNA간우대인궁경암Caski세포CXCR4기인표체적억제작용.방법:인공합성CXCR4특이성소간우RNA(small interfering RNA,siRNA)편단,장기삽입대유록색형광단백(EGFP)적역전록병독재체질립pSOS,측서정학후진행중조,전염PT67세포포장성병독,수획병독상청용기전염Caski세포,채용실시정량PCR화Western blot분별종mRNA수평화단백수평검측기대Caski세포CXCR4표체적억제작용.결과:성공구건pSOS-siCXCR4역전록병독재체,사선출고효억제서렬,여대조조비교,재Caski세포적mRNA수평,CXCR4-siRNA재24h、48h화72h대CXCR4 mRNA표체적억제솔분별위29.9%、56.8%화62.8%,이재단백수평대CXCR4단백적억제솔분별위43.6%、49.6%화62.9%.결론:pSOS-HUS-siCXCR4간우재체가이유효억제Caski세포중CXCR4표체.
