畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2008年
1期
27-31
,共5页
口蹄疫%FMDV%重组腺病毒
口蹄疫%FMDV%重組腺病毒
구제역%FMDV%중조선병독
通过PCR和RT-PCR扩增出目的基因,将FMDV P1和3C基因通过IRES串联,构建出重组腺病毒穿梭质粒,在BJ5173细菌中同源重组获得同源重组腺病毒质粒,转化XL1-Gold超级感受态细胞以扩大培养,Pac Ⅰ酶切后转染AD-293细胞,纯化获得了重组腺病毒.该重组腺病毒于AD-293细胞连续传代培养,初步浓缩后TCID50为1010.71/mL.应用O型口蹄疫病毒阳性血清进行间接荧光抗体试验,病毒感染的AD-293细胞可见清晰荧光,证明该重组腺病毒对目的基因进行了成功的表达,为FMDV P1/3C基因共表达腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.
通過PCR和RT-PCR擴增齣目的基因,將FMDV P1和3C基因通過IRES串聯,構建齣重組腺病毒穿梭質粒,在BJ5173細菌中同源重組穫得同源重組腺病毒質粒,轉化XL1-Gold超級感受態細胞以擴大培養,Pac Ⅰ酶切後轉染AD-293細胞,純化穫得瞭重組腺病毒.該重組腺病毒于AD-293細胞連續傳代培養,初步濃縮後TCID50為1010.71/mL.應用O型口蹄疫病毒暘性血清進行間接熒光抗體試驗,病毒感染的AD-293細胞可見清晰熒光,證明該重組腺病毒對目的基因進行瞭成功的錶達,為FMDV P1/3C基因共錶達腺病毒活載體疫苗的研究奠定瞭基礎.
통과PCR화RT-PCR확증출목적기인,장FMDV P1화3C기인통과IRES천련,구건출중조선병독천사질립,재BJ5173세균중동원중조획득동원중조선병독질립,전화XL1-Gold초급감수태세포이확대배양,Pac Ⅰ매절후전염AD-293세포,순화획득료중조선병독.해중조선병독우AD-293세포련속전대배양,초보농축후TCID50위1010.71/mL.응용O형구제역병독양성혈청진행간접형광항체시험,병독감염적AD-293세포가견청석형광,증명해중조선병독대목적기인진행료성공적표체,위FMDV P1/3C기인공표체선병독활재체역묘적연구전정료기출.
