中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2007年
11期
1238-1242
,共5页
韩平%杨志明%李秀群%王杨%罗静聪%解慧琪
韓平%楊誌明%李秀群%王楊%囉靜聰%解慧琪
한평%양지명%리수군%왕양%라정총%해혜기
膀胱移行上皮细胞%细胞培养%生物学特征%犬
膀胱移行上皮細胞%細胞培養%生物學特徵%犬
방광이행상피세포%세포배양%생물학특정%견
目的 探讨犬膀胱移行上皮细胞体外连续培养和纯化方法,为进一步构建组织工程尿路上皮组织提供实验依据.方法 无菌获取幼犬膀胱组织,0.125%胰蛋白酶消化获取单细胞悬液,于上皮细胞无血清培养基中培养.采用0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化、纯化细胞,动态观察细胞形态变化和增殖情况,MTT法绘制生长曲线;透射电镜观察细胞超微结构;SABC法对培养的细胞进行免疫组织化学鉴定;并采用流式细胞仪检测不同代次细胞的细胞周期和倍体水平.结果 采用酶消化法能从4～6 cm2的膀胱黏膜组织中分离获取(1～5)×106个细胞.原代培养接种24 h后可见大量细胞贴壁,第7天细胞生长融合达80%～90%,细胞排列呈典型的铺路石样.MTT法测定第3代细胞在传代培养7 d生长达高峰;传代并纯化的细胞纯度高,无成纤维细胞污染,至第4～6代细胞仍保持良好形态.透射电镜下,可见上皮细胞特征性张力微丝和细胞间桥粒连接.细胞角蛋白AE1/AE3免疫组织化学染色,胞浆呈棕黄色阳性反应.不同代次细胞均为二倍体细胞.结论 酶消化法能从较少的膀胱组织中分离获取足量、较纯的膀胱移行上皮细胞,细胞在无血清培养基中能连续传代扩增,可以满足进一步构建组织工程尿路上皮组织的需要.
目的 探討犬膀胱移行上皮細胞體外連續培養和純化方法,為進一步構建組織工程尿路上皮組織提供實驗依據.方法 無菌穫取幼犬膀胱組織,0.125%胰蛋白酶消化穫取單細胞懸液,于上皮細胞無血清培養基中培養.採用0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化、純化細胞,動態觀察細胞形態變化和增殖情況,MTT法繪製生長麯線;透射電鏡觀察細胞超微結構;SABC法對培養的細胞進行免疫組織化學鑒定;併採用流式細胞儀檢測不同代次細胞的細胞週期和倍體水平.結果 採用酶消化法能從4～6 cm2的膀胱黏膜組織中分離穫取(1～5)×106箇細胞.原代培養接種24 h後可見大量細胞貼壁,第7天細胞生長融閤達80%～90%,細胞排列呈典型的鋪路石樣.MTT法測定第3代細胞在傳代培養7 d生長達高峰;傳代併純化的細胞純度高,無成纖維細胞汙染,至第4～6代細胞仍保持良好形態.透射電鏡下,可見上皮細胞特徵性張力微絲和細胞間橋粒連接.細胞角蛋白AE1/AE3免疫組織化學染色,胞漿呈棕黃色暘性反應.不同代次細胞均為二倍體細胞.結論 酶消化法能從較少的膀胱組織中分離穫取足量、較純的膀胱移行上皮細胞,細胞在無血清培養基中能連續傳代擴增,可以滿足進一步構建組織工程尿路上皮組織的需要.
목적 탐토견방광이행상피세포체외련속배양화순화방법,위진일보구건조직공정뇨로상피조직제공실험의거.방법 무균획취유견방광조직,0.125%이단백매소화획취단세포현액,우상피세포무혈청배양기중배양.채용0.05%이단백매화0.02%EDTA소화、순화세포,동태관찰세포형태변화화증식정황,MTT법회제생장곡선;투사전경관찰세포초미결구;SABC법대배양적세포진행면역조직화학감정;병채용류식세포의검측불동대차세포적세포주기화배체수평.결과 채용매소화법능종4～6 cm2적방광점막조직중분리획취(1～5)×106개세포.원대배양접충24 h후가견대량세포첩벽,제7천세포생장융합체80%～90%,세포배렬정전형적포로석양.MTT법측정제3대세포재전대배양7 d생장체고봉;전대병순화적세포순도고,무성섬유세포오염,지제4～6대세포잉보지량호형태.투사전경하,가견상피세포특정성장력미사화세포간교립련접.세포각단백AE1/AE3면역조직화학염색,포장정종황색양성반응.불동대차세포균위이배체세포.결론 매소화법능종교소적방광조직중분리획취족량、교순적방광이행상피세포,세포재무혈청배양기중능련속전대확증,가이만족진일보구건조직공정뇨로상피조직적수요.
