生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
756-758
,共3页
邢克飞%吴琳%李燕%刘新平%药立波%李福洋
邢剋飛%吳琳%李燕%劉新平%藥立波%李福洋
형극비%오림%리연%류신평%약립파%리복양
DNA甲基化酶%靶向性%毕赤酵母
DNA甲基化酶%靶嚮性%畢赤酵母
DNA갑기화매%파향성%필적효모
目的:在毕赤酵母中表达融合Myc-His标签的靶向性甲基化酶B1-3a并进行鉴定.方法:以含有B1-3a基因的pcDNA4.0-myc/his质粒为模板,通过PCR扩增获得融合有myc/his标签序列的目的区段B1-3a基因,然后克隆入表达载体pPIC3.5k;电穿孔转化毕赤酵母菌株GS115,经G418筛选后进行甲醇诱导表达,并以SDS-PAGE和Westem印迹对表达产物进行鉴定.结果:表达产物中可见与目的蛋白相对分子质量(50 000)相符的条带,该条带可被Myc标签单克隆抗体特异识别.结论:正确构建了靶向性甲基化酶B1-3a的酵母表达载体,靶向性甲基化酶能够在毕赤酵母中成功表达.
目的:在畢赤酵母中錶達融閤Myc-His標籤的靶嚮性甲基化酶B1-3a併進行鑒定.方法:以含有B1-3a基因的pcDNA4.0-myc/his質粒為模闆,通過PCR擴增穫得融閤有myc/his標籤序列的目的區段B1-3a基因,然後剋隆入錶達載體pPIC3.5k;電穿孔轉化畢赤酵母菌株GS115,經G418篩選後進行甲醇誘導錶達,併以SDS-PAGE和Westem印跡對錶達產物進行鑒定.結果:錶達產物中可見與目的蛋白相對分子質量(50 000)相符的條帶,該條帶可被Myc標籤單剋隆抗體特異識彆.結論:正確構建瞭靶嚮性甲基化酶B1-3a的酵母錶達載體,靶嚮性甲基化酶能夠在畢赤酵母中成功錶達.
목적:재필적효모중표체융합Myc-His표첨적파향성갑기화매B1-3a병진행감정.방법:이함유B1-3a기인적pcDNA4.0-myc/his질립위모판,통과PCR확증획득융합유myc/his표첨서렬적목적구단B1-3a기인,연후극륭입표체재체pPIC3.5k;전천공전화필적효모균주GS115,경G418사선후진행갑순유도표체,병이SDS-PAGE화Westem인적대표체산물진행감정.결과:표체산물중가견여목적단백상대분자질량(50 000)상부적조대,해조대가피Myc표첨단극륭항체특이식별.결론:정학구건료파향성갑기화매B1-3a적효모표체재체,파향성갑기화매능구재필적효모중성공표체.
