中国现代神经疾病杂志
中國現代神經疾病雜誌
중국현대신경질병잡지
CHINESE JOURNAL OF CONTEMPORARY NEUROLOGY AND NEUROSURGERY
2007年
4期
347-351
,共5页
贺子建%卞留贯%贺华%孙青芳%赵卫国%沈建康
賀子建%卞留貫%賀華%孫青芳%趙衛國%瀋建康
하자건%변류관%하화%손청방%조위국%침건강
基因,神经纤维瘤病2型%聚合酶链反应%质粒%转染%基因表达
基因,神經纖維瘤病2型%聚閤酶鏈反應%質粒%轉染%基因錶達
기인,신경섬유류병2형%취합매련반응%질립%전염%기인표체
目的 构建野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因(NF2)Ⅱ亚型的真核表达载体,观察其在人胚胎肾细胞293(HEK293)中的表达并检测其转染神经鞘瘤细胞(RT4)后的功能.方法 以人胎脑cDNA文库中的NF2Ⅱ亚型基因为模板,应用聚合酶链反应技术扩增野生型NF2 Ⅱ亚型基因,并定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1质粒中;经鉴定正确的重组质粒pEGFP-NF2 Ⅱ亚型,用Lipofectamine 2000脂质体导入人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting法观察基因表达水平;随后转染大鼠神经鞘瘤细胞,利用水溶性四氮唑法观察野生型NF2 Ⅱ亚型基因对大鼠神经鞘瘤细胞增殖的影响.结果 经序列分析证实,克隆的NF2 Ⅱ亚型基因与Genebank中的序列完全一致.DNA琼脂糖凝胶电泳检测显示,经双酶切后的质粒pEGFP cDNA片段大小约为4700 bp;NF2 Ⅱ亚型基因cDNA片段大小为1 770 bp,NF2 Ⅱ亚型基因的真核表达载体可瞬时转染人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting方法得到证实;水溶性四氮唑法检测显示,转染pEGFP-NF2 Ⅱ亚型并表达NF2 Ⅱ亚型编码蛋白的293细胞与对照组293细胞的增殖指数相同.结论 所构建的野生型NF2 Ⅱ亚型基因真核表达载体可在人胚胎肾细胞293中表达,且不具有抑制肿瘤细胞增殖的特性.
目的 構建野生型Ⅱ型神經纖維瘤病基因(NF2)Ⅱ亞型的真覈錶達載體,觀察其在人胚胎腎細胞293(HEK293)中的錶達併檢測其轉染神經鞘瘤細胞(RT4)後的功能.方法 以人胎腦cDNA文庫中的NF2Ⅱ亞型基因為模闆,應用聚閤酶鏈反應技術擴增野生型NF2 Ⅱ亞型基因,併定嚮剋隆至真覈錶達載體pEGFP-N1質粒中;經鑒定正確的重組質粒pEGFP-NF2 Ⅱ亞型,用Lipofectamine 2000脂質體導入人胚胎腎細胞293,通過熒光顯微鏡和Western Blotting法觀察基因錶達水平;隨後轉染大鼠神經鞘瘤細胞,利用水溶性四氮唑法觀察野生型NF2 Ⅱ亞型基因對大鼠神經鞘瘤細胞增殖的影響.結果 經序列分析證實,剋隆的NF2 Ⅱ亞型基因與Genebank中的序列完全一緻.DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示,經雙酶切後的質粒pEGFP cDNA片段大小約為4700 bp;NF2 Ⅱ亞型基因cDNA片段大小為1 770 bp,NF2 Ⅱ亞型基因的真覈錶達載體可瞬時轉染人胚胎腎細胞293,通過熒光顯微鏡和Western Blotting方法得到證實;水溶性四氮唑法檢測顯示,轉染pEGFP-NF2 Ⅱ亞型併錶達NF2 Ⅱ亞型編碼蛋白的293細胞與對照組293細胞的增殖指數相同.結論 所構建的野生型NF2 Ⅱ亞型基因真覈錶達載體可在人胚胎腎細胞293中錶達,且不具有抑製腫瘤細胞增殖的特性.
목적 구건야생형Ⅱ형신경섬유류병기인(NF2)Ⅱ아형적진핵표체재체,관찰기재인배태신세포293(HEK293)중적표체병검측기전염신경초류세포(RT4)후적공능.방법 이인태뇌cDNA문고중적NF2Ⅱ아형기인위모판,응용취합매련반응기술확증야생형NF2 Ⅱ아형기인,병정향극륭지진핵표체재체pEGFP-N1질립중;경감정정학적중조질립pEGFP-NF2 Ⅱ아형,용Lipofectamine 2000지질체도입인배태신세포293,통과형광현미경화Western Blotting법관찰기인표체수평;수후전염대서신경초류세포,이용수용성사담서법관찰야생형NF2 Ⅱ아형기인대대서신경초류세포증식적영향.결과 경서렬분석증실,극륭적NF2 Ⅱ아형기인여Genebank중적서렬완전일치.DNA경지당응효전영검측현시,경쌍매절후적질립pEGFP cDNA편단대소약위4700 bp;NF2 Ⅱ아형기인cDNA편단대소위1 770 bp,NF2 Ⅱ아형기인적진핵표체재체가순시전염인배태신세포293,통과형광현미경화Western Blotting방법득도증실;수용성사담서법검측현시,전염pEGFP-NF2 Ⅱ아형병표체NF2 Ⅱ아형편마단백적293세포여대조조293세포적증식지수상동.결론 소구건적야생형NF2 Ⅱ아형기인진핵표체재체가재인배태신세포293중표체,차불구유억제종류세포증식적특성.
