抗人CD3改形单链抗体的构建、表达及活性测定
항인CD3개형단련항체적구건、표체급활성측정
Construction, Expression and Activity Test of a Reshaping Single-chain Antibody Against Human CD3
  • 万方数据
    遗传学报 유전학보
    ACTA GENETICA SINICA
    2000年 9期 762-771 ,共10页

    蒋欣%俞小淙%刘喜富%张卫国%黄浩旻%林晴%孙健%陈润生%黄华梁

    장흔%유소종%류희부%장위국%황호민%림청%손건%진윤생%황화량

    CD3%改形抗体%表达载体%构建%表达 CD3%改形抗體%錶達載體%構建%錶達
    CD3%개형항체%표체재체%구건%표체
    CD3单抗通过多种途径有效地影响机体的免疫状态,在临床应用中具有极大的潜力.为克服鼠源单抗用于临床的局限性,拟采用抗体工程技术研制抗人CD3改形单链抗体.首先,将鼠源CD3单抗OKT3轻重链CDRs分别移植到人源抗体LS1轻链和Nd重链的框架中,经计算机模拟其空间构象,进行残基替换,确定CD3改形VL、VH氨基酸序列,化学合成改形VL、VH基因,将其分别插入至载体pROH80中,构建成抗人CD3改形单链抗体(scFv)基因.再将scFv基因克隆至构建的表达载体pALM中诱导表达,产物主要为包涵体.对包涵体进行变性和复性,用IMAC法纯化,FACS法测定CD3改形scFv与抗原的结合活性,显示其竞争抑制率为18%.
    CD3단항통과다충도경유효지영향궤체적면역상태,재림상응용중구유겁대적잠력.위극복서원단항용우림상적국한성,의채용항체공정기술연제항인CD3개형단련항체.수선,장서원CD3단항OKT3경중련CDRs분별이식도인원항체LS1경련화Nd중련적광가중,경계산궤모의기공간구상,진행잔기체환,학정CD3개형VL、VH안기산서렬,화학합성개형VL、VH기인,장기분별삽입지재체pROH80중,구건성항인CD3개형단련항체(scFv)기인.재장scFv기인극륭지구건적표체재체pALM중유도표체,산물주요위포함체.대포함체진행변성화복성,용IMAC법순화,FACS법측정CD3개형scFv여항원적결합활성,현시기경쟁억제솔위18%.
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