中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
1998年
2期
138-143
,共6页
真核表达质粒 人apoE7基因 MT-Ⅰ启动子 NIH/3T3细胞中图 号Q78 R394.3
真覈錶達質粒 人apoE7基因 MT-Ⅰ啟動子 NIH/3T3細胞中圖 號Q78 R394.3
진핵표체질립 인apoE7기인 MT-Ⅰ계동자 NIH/3T3세포중도 호Q78 R394.3
目的为了探索人apoE7基因受控于异源启动子MT-Ⅰ时,能否在鼠类细胞中表达.方法自10.3kb人apoE7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE7基因组DNA片段(6.0kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(MT-Ⅰ)重组,构建pME7真核表达质粒,用Lipofectamine转染NIH/3T3细胞.结果瞬时表达结果表明,重组pME7质粒能够在NIH/3T3细胞中表达.稳定表达的结果则表明,人apoE7基因的表达水平与其整合到宿主细胞基因组的拷贝数密切相关.ELISA测定结果显示,人apoE7基因在NIH/3T3细胞中可以进行正确的转录剪切和翻译加工,合成有生物活性的人apoE7蛋白;研究结果还表明:重金属可以诱导增强人apoE7基因的高效表达,诱导后表达水平提高45%～60%.结论人apoE7基因的表达不仅局限于人类的组织细胞,也可以在鼠类组织细胞中表达;而且MT-Ⅰ启动子能够诱导表达人apoE7基因,为人apoE7转基因小鼠模型的建立奠定了基础.
目的為瞭探索人apoE7基因受控于異源啟動子MT-Ⅰ時,能否在鼠類細胞中錶達.方法自10.3kb人apoE7基因組DNA穫得不帶自身啟動子的人apoE7基因組DNA片段(6.0kb),與小鼠金屬硫蛋白啟動子(MT-Ⅰ)重組,構建pME7真覈錶達質粒,用Lipofectamine轉染NIH/3T3細胞.結果瞬時錶達結果錶明,重組pME7質粒能夠在NIH/3T3細胞中錶達.穩定錶達的結果則錶明,人apoE7基因的錶達水平與其整閤到宿主細胞基因組的拷貝數密切相關.ELISA測定結果顯示,人apoE7基因在NIH/3T3細胞中可以進行正確的轉錄剪切和翻譯加工,閤成有生物活性的人apoE7蛋白;研究結果還錶明:重金屬可以誘導增彊人apoE7基因的高效錶達,誘導後錶達水平提高45%～60%.結論人apoE7基因的錶達不僅跼限于人類的組織細胞,也可以在鼠類組織細胞中錶達;而且MT-Ⅰ啟動子能夠誘導錶達人apoE7基因,為人apoE7轉基因小鼠模型的建立奠定瞭基礎.
목적위료탐색인apoE7기인수공우이원계동자MT-Ⅰ시,능부재서류세포중표체.방법자10.3kb인apoE7기인조DNA획득불대자신계동자적인apoE7기인조DNA편단(6.0kb),여소서금속류단백계동자(MT-Ⅰ)중조,구건pME7진핵표체질립,용Lipofectamine전염NIH/3T3세포.결과순시표체결과표명,중조pME7질립능구재NIH/3T3세포중표체.은정표체적결과칙표명,인apoE7기인적표체수평여기정합도숙주세포기인조적고패수밀절상관.ELISA측정결과현시,인apoE7기인재NIH/3T3세포중가이진행정학적전록전절화번역가공,합성유생물활성적인apoE7단백;연구결과환표명:중금속가이유도증강인apoE7기인적고효표체,유도후표체수평제고45%～60%.결론인apoE7기인적표체불부국한우인류적조직세포,야가이재서류조직세포중표체;이차MT-Ⅰ계동자능구유도표체인apoE7기인,위인apoE7전기인소서모형적건립전정료기출.
