CAJ | 학술논문

目的研究反义RNA对β-地中海贫血红系细胞IVS2-654C→T(β654)突变mRNA异常剪接的纠正作用.方法构建特异性针对β654mRNA前体异常剪接位点的反义RNA表达载体,和不针对上述位点的反义对照载体,转染培养的β654红系细胞后,抽提总RNA;以RT-PCR法作mRNA定量,检测正常和异常剪接的β-珠蛋白mRNA产物的比例[β/(β+β*)];以珠蛋白肽链体外生物合成分析红系细胞中β-和α-珠蛋白肽链合成的比例(β/α).结果在RNA水平,β654/β654纯合子的β/(β+β*)值由0.19(转染后第0天)上升到0.58(第8天),β654/βA杂合子由0.45(0天)上升到0.83(第8天);在珠蛋白肽链水平,β654/β654细胞的β/α值由0.16(0天)上升到0.52(第8天),β654/βA细胞由0.39(0天)上升到0.84(第8天).反义RNA处理βA/βA红系细胞以及对照RNA处理这3类红系细胞,对其mRNA剪接和珠蛋白肽链合成均影响不大.结论特异性反义RNA能抑制红系细胞β654mRNA前体的异常剪接,部分恢复其正常剪接途径,从而改善珠蛋白肽链合成的不平衡状况.
목적연구반의RNA대β-지중해빈혈홍계세포IVS2-654C→T(β654)돌변mRNA이상전접적규정작용.방법구건특이성침대β654mRNA전체이상전접위점적반의RNA표체재체,화불침대상술위점적반의대조재체,전염배양적β654홍계세포후,추제총RNA;이RT-PCR법작mRNA정량,검측정상화이상전접적β-주단백mRNA산물적비례[β/(β+β*)];이주단백태련체외생물합성분석홍계세포중β-화α-주단백태련합성적비례(β/α).결과재RNA수평,β654/β654순합자적β/(β+β*)치유0.19(전염후제0천)상승도0.58(제8천),β654/βA잡합자유0.45(0천)상승도0.83(제8천);재주단백태련수평,β654/β654세포적β/α치유0.16(0천)상승도0.52(제8천),β654/βA세포유0.39(0천)상승도0.84(제8천).반의RNA처리βA/βA홍계세포이급대조RNA처리저3류홍계세포,대기mRNA전접화주단백태련합성균영향불대.결론특이성반의RNA능억제홍계세포β654mRNA전체적이상전접,부분회복기정상전접도경,종이개선주단백태련합성적불평형상황.