中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2002年
11期
772-775
,共4页
HLA RT-PCR 基因克隆 基因表达
HLA RT-PCR 基因剋隆 基因錶達
HLA RT-PCR 기인극륭 기인표체
目的:构建人白细胞抗原(RLA-C)基因真核细胞表达载体,在JAR细胞表面表达,并对其功能进行探讨.方法:用RT-PCR从人外周血淋巴细胞的总mRNA中逆转录扩增HLA-C的cDNA,克隆到PBluescript SD+/-噬菌粒中;测序鉴定后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中.经脂质体转染JAR细胞,G418筛选阳性克隆,FACS检测RLA-C分子的表达.转染HLA-C分子的JAR细胞再与分离的NK细胞进行细胞毒试验.结果:限制性内切酶酶切和序列分析表明,克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中的HLA-C等位基因是HLA-Cw*0602,该分子在JAR细胞株获得高效表达.直接分离的PBL细胞对JAR细胞以及表达HLA-C分子的JAR细胞无细胞毒作用;而IL-2活化的NK细胞对这些细胞都有细胞毒作用.结论:RLA-C基因的成功表达为研究HLA-C分子与NK细胞受体((KIR)之间的关系奠定了基础,NK细胞对JAR细胞的杀伤可能存在不依赖HLA-C分子的机制.
目的:構建人白細胞抗原(RLA-C)基因真覈細胞錶達載體,在JAR細胞錶麵錶達,併對其功能進行探討.方法:用RT-PCR從人外週血淋巴細胞的總mRNA中逆轉錄擴增HLA-C的cDNA,剋隆到PBluescript SD+/-噬菌粒中;測序鑒定後,定嚮亞剋隆到真覈細胞錶達載體pcDNA3中.經脂質體轉染JAR細胞,G418篩選暘性剋隆,FACS檢測RLA-C分子的錶達.轉染HLA-C分子的JAR細胞再與分離的NK細胞進行細胞毒試驗.結果:限製性內切酶酶切和序列分析錶明,剋隆到真覈細胞錶達載體pcDNA3中的HLA-C等位基因是HLA-Cw*0602,該分子在JAR細胞株穫得高效錶達.直接分離的PBL細胞對JAR細胞以及錶達HLA-C分子的JAR細胞無細胞毒作用;而IL-2活化的NK細胞對這些細胞都有細胞毒作用.結論:RLA-C基因的成功錶達為研究HLA-C分子與NK細胞受體((KIR)之間的關繫奠定瞭基礎,NK細胞對JAR細胞的殺傷可能存在不依賴HLA-C分子的機製.
목적:구건인백세포항원(RLA-C)기인진핵세포표체재체,재JAR세포표면표체,병대기공능진행탐토.방법:용RT-PCR종인외주혈림파세포적총mRNA중역전록확증HLA-C적cDNA,극륭도PBluescript SD+/-서균립중;측서감정후,정향아극륭도진핵세포표체재체pcDNA3중.경지질체전염JAR세포,G418사선양성극륭,FACS검측RLA-C분자적표체.전염HLA-C분자적JAR세포재여분리적NK세포진행세포독시험.결과:한제성내절매매절화서렬분석표명,극륭도진핵세포표체재체pcDNA3중적HLA-C등위기인시HLA-Cw*0602,해분자재JAR세포주획득고효표체.직접분리적PBL세포대JAR세포이급표체HLA-C분자적JAR세포무세포독작용;이IL-2활화적NK세포대저사세포도유세포독작용.결론:RLA-C기인적성공표체위연구HLA-C분자여NK세포수체((KIR)지간적관계전정료기출,NK세포대JAR세포적살상가능존재불의뢰HLA-C분자적궤제.
