中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2001年
11期
1133
,共1页
袁开宇%赵震宇%刘瑛%陈广文%尢家马录%肖献忠
袁開宇%趙震宇%劉瑛%陳廣文%尢傢馬錄%肖獻忠
원개우%조진우%류영%진엄문%왕가마록%초헌충
目的:利用cDNA微阵列研究小鼠在内毒素休克早期及晚期肺组织基因表达谱(Gene expressio n profile)的改变,从基因组水平阐明内毒素休克的发生机制,并试图发现某些未知的内毒素休克相关基因.方法:BALB/c小鼠经腹腔注射大肠杆菌内毒素0111B4( 15 mg/kg)2 h及20 h后摘取心、肝、肺、肾、脑等组织,Trizol提取总RNA,经反转录及a-32P-dATP掺入合成cDNA探针,与Clontech公司产含1176个基因的cDNA微阵列膜进行杂交并放射自显影, X光胶片经透射扫描仪扫描后用本科室开发的密度分析软件分析微阵列中各点阵杂交密度. 结果:1.注射内毒素后小鼠死亡率为59%,其中44%在24 h内死亡.2 .内毒素处理2 h 小鼠肺组织有128个基因表达明显上调(上调＞10倍者33个,5-10倍者24个,2-5倍者71个), 并有4个基因表达明显下调.3.内毒素处理20 h小鼠肺组织有51个基因表达明显上调(上调＞10倍者16个,5-10倍者7个,2-5倍者28个),并有21个基因表达明显下调.4.内毒素处理20 h与处理2 h小鼠肺组织相比有13个基因表达明显上调(上调5-l0倍者1个,上调2-5 倍者12个),有105个基因表达明显下调.5.在内毒素处理2 h表达明显上调的128个基因中,内毒素处理20 h后有93个明显恢复或下调;有36个仍然上调.6.内毒素处理2 h表达明显下调的4个基因中,内毒素处理20 h后有2个明显恢复或上调;有2个仍然下调.7. 为证实cDNA微阵列分析结果的可靠性,从休克20 h表达增加的基因中选出4个进行RT-PCR 检测,发现检测结果与cDNA微阵列分析结果相符.讨论:内毒素休克的发病机制十分复杂, 涉及多种组织、细胞的激活及大量炎症介质的表达.以往的研究常限于测定单个或几个炎症介质的表达或分析单一的细胞内信号转导途径的作用,忽略了多种炎症介质及信号传导途径的同时存在及相互作用,难以全面揭示内毒素休克的分子机制.本研究采用cDNA微阵列技术 ,首次发现内毒素休克2 h有128个基因表达上调,表明内毒素休克早期是基因表达的活跃期,这些基因改变可能启动和维持了后续的病理生理变化.在休克20 h有51个基因表达上调及21个基因下调,这些基因表达的变化可能是内毒素休克转入不可逆期的分子基础.目前本室正对上述基因表达变化的意义及内毒素休克小鼠其它组织中基因表达的改变做进一步的分析.本研究有助于从基因组水平阐明内毒素休克的分子机制,可能为进一步探讨内毒素休克的干预措施提供实验依据.
目的:利用cDNA微陣列研究小鼠在內毒素休剋早期及晚期肺組織基因錶達譜(Gene expressio n profile)的改變,從基因組水平闡明內毒素休剋的髮生機製,併試圖髮現某些未知的內毒素休剋相關基因.方法:BALB/c小鼠經腹腔註射大腸桿菌內毒素0111B4( 15 mg/kg)2 h及20 h後摘取心、肝、肺、腎、腦等組織,Trizol提取總RNA,經反轉錄及a-32P-dATP摻入閤成cDNA探針,與Clontech公司產含1176箇基因的cDNA微陣列膜進行雜交併放射自顯影, X光膠片經透射掃描儀掃描後用本科室開髮的密度分析軟件分析微陣列中各點陣雜交密度. 結果:1.註射內毒素後小鼠死亡率為59%,其中44%在24 h內死亡.2 .內毒素處理2 h 小鼠肺組織有128箇基因錶達明顯上調(上調＞10倍者33箇,5-10倍者24箇,2-5倍者71箇), 併有4箇基因錶達明顯下調.3.內毒素處理20 h小鼠肺組織有51箇基因錶達明顯上調(上調＞10倍者16箇,5-10倍者7箇,2-5倍者28箇),併有21箇基因錶達明顯下調.4.內毒素處理20 h與處理2 h小鼠肺組織相比有13箇基因錶達明顯上調(上調5-l0倍者1箇,上調2-5 倍者12箇),有105箇基因錶達明顯下調.5.在內毒素處理2 h錶達明顯上調的128箇基因中,內毒素處理20 h後有93箇明顯恢複或下調;有36箇仍然上調.6.內毒素處理2 h錶達明顯下調的4箇基因中,內毒素處理20 h後有2箇明顯恢複或上調;有2箇仍然下調.7. 為證實cDNA微陣列分析結果的可靠性,從休剋20 h錶達增加的基因中選齣4箇進行RT-PCR 檢測,髮現檢測結果與cDNA微陣列分析結果相符.討論:內毒素休剋的髮病機製十分複雜, 涉及多種組織、細胞的激活及大量炎癥介質的錶達.以往的研究常限于測定單箇或幾箇炎癥介質的錶達或分析單一的細胞內信號轉導途徑的作用,忽略瞭多種炎癥介質及信號傳導途徑的同時存在及相互作用,難以全麵揭示內毒素休剋的分子機製.本研究採用cDNA微陣列技術 ,首次髮現內毒素休剋2 h有128箇基因錶達上調,錶明內毒素休剋早期是基因錶達的活躍期,這些基因改變可能啟動和維持瞭後續的病理生理變化.在休剋20 h有51箇基因錶達上調及21箇基因下調,這些基因錶達的變化可能是內毒素休剋轉入不可逆期的分子基礎.目前本室正對上述基因錶達變化的意義及內毒素休剋小鼠其它組織中基因錶達的改變做進一步的分析.本研究有助于從基因組水平闡明內毒素休剋的分子機製,可能為進一步探討內毒素休剋的榦預措施提供實驗依據.
목적:이용cDNA미진렬연구소서재내독소휴극조기급만기폐조직기인표체보(Gene expressio n profile)적개변,종기인조수평천명내독소휴극적발생궤제,병시도발현모사미지적내독소휴극상관기인.방법:BALB/c소서경복강주사대장간균내독소0111B4( 15 mg/kg)2 h급20 h후적취심、간、폐、신、뇌등조직,Trizol제취총RNA,경반전록급a-32P-dATP참입합성cDNA탐침,여Clontech공사산함1176개기인적cDNA미진렬막진행잡교병방사자현영, X광효편경투사소묘의소묘후용본과실개발적밀도분석연건분석미진렬중각점진잡교밀도. 결과:1.주사내독소후소서사망솔위59%,기중44%재24 h내사망.2 .내독소처리2 h 소서폐조직유128개기인표체명현상조(상조＞10배자33개,5-10배자24개,2-5배자71개), 병유4개기인표체명현하조.3.내독소처리20 h소서폐조직유51개기인표체명현상조(상조＞10배자16개,5-10배자7개,2-5배자28개),병유21개기인표체명현하조.4.내독소처리20 h여처리2 h소서폐조직상비유13개기인표체명현상조(상조5-l0배자1개,상조2-5 배자12개),유105개기인표체명현하조.5.재내독소처리2 h표체명현상조적128개기인중,내독소처리20 h후유93개명현회복혹하조;유36개잉연상조.6.내독소처리2 h표체명현하조적4개기인중,내독소처리20 h후유2개명현회복혹상조;유2개잉연하조.7. 위증실cDNA미진렬분석결과적가고성,종휴극20 h표체증가적기인중선출4개진행RT-PCR 검측,발현검측결과여cDNA미진렬분석결과상부.토론:내독소휴극적발병궤제십분복잡, 섭급다충조직、세포적격활급대량염증개질적표체.이왕적연구상한우측정단개혹궤개염증개질적표체혹분석단일적세포내신호전도도경적작용,홀략료다충염증개질급신호전도도경적동시존재급상호작용,난이전면게시내독소휴극적분자궤제.본연구채용cDNA미진렬기술 ,수차발현내독소휴극2 h유128개기인표체상조,표명내독소휴극조기시기인표체적활약기,저사기인개변가능계동화유지료후속적병리생리변화.재휴극20 h유51개기인표체상조급21개기인하조,저사기인표체적변화가능시내독소휴극전입불가역기적분자기출.목전본실정대상술기인표체변화적의의급내독소휴극소서기타조직중기인표체적개변주진일보적분석.본연구유조우종기인조수평천명내독소휴극적분자궤제,가능위진일보탐토내독소휴극적간예조시제공실험의거.
