科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2004年
3期
189-193
,共5页
姜云水%方平楚%付亚萍%朱诚
薑雲水%方平楚%付亞萍%硃誠
강운수%방평초%부아평%주성
生物工程%幽门螺杆菌%cagA基因%CTB基因%水稻Wx启动子%基因融合%植物表达载体
生物工程%幽門螺桿菌%cagA基因%CTB基因%水稻Wx啟動子%基因融閤%植物錶達載體
생물공정%유문라간균%cagA기인%CTB기인%수도Wx계동자%기인융합%식물표체재체
目的构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM-CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3'端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBIA1300的表达框架内.结果 PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBIA1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础.
目的構建能在水稻胚乳中特異錶達的幽門螺桿菌細胞毒素相關蛋白(CagA)和霍亂毒素B亞單位(CTB)的植物錶達載體.方法採用高保真PCR技術分彆從質粒pGEM-CTB和幽門螺桿菌基因組DNA中擴增齣CTB和cagA基因,然後用PCR方法直接融閤CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造瞭水稻Wx啟動子,在其3'耑融閤加入Ω序列和Kozak序列.通過一繫列亞剋隆最終將兩箇融閤基因和NOS終止子插入根癌農桿菌雙元載體pCAMBIA1300的錶達框架內.結果 PCR驗證和測序分析證明,CTB和cagA融閤基因以正確的方嚮插入到載體pCAMBIA1300中,併位于水稻Wx啟動子後.結論成功構建CTB和cagA融閤基因的植物錶達載體,為幽門螺桿菌口服疫苗的研究奠定基礎.
목적구건능재수도배유중특이표체적유문라간균세포독소상관단백(CagA)화곽란독소B아단위(CTB)적식물표체재체.방법채용고보진PCR기술분별종질립pGEM-CTB화유문라간균기인조DNA중확증출CTB화cagA기인,연후용PCR방법직접융합CTB기인화cagA기인.우용PCR법개조료수도Wx계동자,재기3'단융합가입Ω서렬화Kozak서렬.통과일계렬아극륭최종장량개융합기인화NOS종지자삽입근암농간균쌍원재체pCAMBIA1300적표체광가내.결과 PCR험증화측서분석증명,CTB화cagA융합기인이정학적방향삽입도재체pCAMBIA1300중,병위우수도Wx계동자후.결론성공구건CTB화cagA융합기인적식물표체재체,위유문라간균구복역묘적연구전정기출.
