山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2004年
5期
525-530
,共6页
于瑾%赵蔚明%齐眉%宋长芹%赵丽%刘传聚%Peter Lengyel%于修平
于瑾%趙蔚明%齊眉%宋長芹%趙麗%劉傳聚%Peter Lengyel%于脩平
우근%조위명%제미%송장근%조려%류전취%Peter Lengyel%우수평
乳头状瘤病毒,人%干扰素诱导剂%E6蛋白%E7蛋白%宫颈肿瘤
乳頭狀瘤病毒,人%榦擾素誘導劑%E6蛋白%E7蛋白%宮頸腫瘤
유두상류병독,인%간우소유도제%E6단백%E7단백%궁경종류
目的:研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6、E7蛋白与干扰素诱导蛋白IFI16的相互作用,初步揭示IFI16拮抗HPV16E6、E7致瘤活性的分子机制.方法:(1)体外GST阻滞分析:克隆、表达及纯化GST-HPV16E6和GST-HPV16E7融合蛋白,将含有IFI16蛋白的EB病毒阴性伯基特淋巴瘤(BJAB)细胞提取物与上述纯化蛋白孵育,通过Western B1otting分析蛋白质的体外相互作用;(2)免疫共沉淀分析:构建表达His-HPV16E6蛋白的真核表达载体,将表达有IFI16和HIs-HPV16E6蛋白的293T细胞裂解物与抗His抗体孵育,用IFI16抗体检测共沉淀蛋白复合物中IFI16蛋白的存在;将表达有IFI16和HPV16E7蛋白的CaSki和SiHa细胞裂解物与HPV16E7抗体孵育,检测共沉淀蛋白复合物中E7与IFI16是否结合.结果:成功构建了原核表达质粒pGEX4T/HPV16E6及pGEX-4T/HPV16E7,并表达、纯化获得GST-HPV16E6及GST-HPV16E7融合蛋白.体外GST阻滞分析结果表明,用IFI16单抗做Western B1otting分析可检测到复合物中IFI16蛋白,表明GST-HPV16E6和GST-HPV16E7均可与IFI16蛋白结合.免疫共沉淀分析进一步证实,共沉淀蛋白复合物中也可检测到IFI16蛋白,证明在细胞中HPV16E6和E7蛋白也能与IFI16蛋白结合.结论:无论在体外还是在细胞中,抑瘤因子IFI16蛋白均能特异性地结合HPV16 E6和E7蛋白.为进一步揭示IFI16拮抗HPV主要癌蛋白E6、E7的分子机制奠定了基础.
目的:研究人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6、E7蛋白與榦擾素誘導蛋白IFI16的相互作用,初步揭示IFI16拮抗HPV16E6、E7緻瘤活性的分子機製.方法:(1)體外GST阻滯分析:剋隆、錶達及純化GST-HPV16E6和GST-HPV16E7融閤蛋白,將含有IFI16蛋白的EB病毒陰性伯基特淋巴瘤(BJAB)細胞提取物與上述純化蛋白孵育,通過Western B1otting分析蛋白質的體外相互作用;(2)免疫共沉澱分析:構建錶達His-HPV16E6蛋白的真覈錶達載體,將錶達有IFI16和HIs-HPV16E6蛋白的293T細胞裂解物與抗His抗體孵育,用IFI16抗體檢測共沉澱蛋白複閤物中IFI16蛋白的存在;將錶達有IFI16和HPV16E7蛋白的CaSki和SiHa細胞裂解物與HPV16E7抗體孵育,檢測共沉澱蛋白複閤物中E7與IFI16是否結閤.結果:成功構建瞭原覈錶達質粒pGEX4T/HPV16E6及pGEX-4T/HPV16E7,併錶達、純化穫得GST-HPV16E6及GST-HPV16E7融閤蛋白.體外GST阻滯分析結果錶明,用IFI16單抗做Western B1otting分析可檢測到複閤物中IFI16蛋白,錶明GST-HPV16E6和GST-HPV16E7均可與IFI16蛋白結閤.免疫共沉澱分析進一步證實,共沉澱蛋白複閤物中也可檢測到IFI16蛋白,證明在細胞中HPV16E6和E7蛋白也能與IFI16蛋白結閤.結論:無論在體外還是在細胞中,抑瘤因子IFI16蛋白均能特異性地結閤HPV16 E6和E7蛋白.為進一步揭示IFI16拮抗HPV主要癌蛋白E6、E7的分子機製奠定瞭基礎.
목적:연구인유두류병독(human papillomavirus,HPV)16형E6、E7단백여간우소유도단백IFI16적상호작용,초보게시IFI16길항HPV16E6、E7치류활성적분자궤제.방법:(1)체외GST조체분석:극륭、표체급순화GST-HPV16E6화GST-HPV16E7융합단백,장함유IFI16단백적EB병독음성백기특림파류(BJAB)세포제취물여상술순화단백부육,통과Western B1otting분석단백질적체외상호작용;(2)면역공침정분석:구건표체His-HPV16E6단백적진핵표체재체,장표체유IFI16화HIs-HPV16E6단백적293T세포렬해물여항His항체부육,용IFI16항체검측공침정단백복합물중IFI16단백적존재;장표체유IFI16화HPV16E7단백적CaSki화SiHa세포렬해물여HPV16E7항체부육,검측공침정단백복합물중E7여IFI16시부결합.결과:성공구건료원핵표체질립pGEX4T/HPV16E6급pGEX-4T/HPV16E7,병표체、순화획득GST-HPV16E6급GST-HPV16E7융합단백.체외GST조체분석결과표명,용IFI16단항주Western B1otting분석가검측도복합물중IFI16단백,표명GST-HPV16E6화GST-HPV16E7균가여IFI16단백결합.면역공침정분석진일보증실,공침정단백복합물중야가검측도IFI16단백,증명재세포중HPV16E6화E7단백야능여IFI16단백결합.결론:무론재체외환시재세포중,억류인자IFI16단백균능특이성지결합HPV16 E6화E7단백.위진일보게시IFI16길항HPV주요암단백E6、E7적분자궤제전정료기출.
