微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
6期
876-880
,共5页
彭平%吴襟%程安春%高启禹%张树政
彭平%吳襟%程安春%高啟禹%張樹政
팽평%오금%정안춘%고계우%장수정
芽孢杆菌%α-淀粉酶%基因克隆和表达%酶学性质
芽孢桿菌%α-澱粉酶%基因剋隆和錶達%酶學性質
아포간균%α-정분매%기인극륭화표체%매학성질
在仔猪结肠内容物中分离出一株能利用淀粉的芽孢杆菌Bacillus sp. WS06, 构建了全基因组DNA文库,从中筛选出α-淀粉酶基因amyF,分析测定了其核苷酸序列并进行了表达;其中amyF编码的蛋白有526个氨基酸、分子量为58.6kD;它与已报道的Bacillus megaterium的α-淀粉酶序列有93%的同源性.经过氨基酸序列比较分析还发现,AmyF含有淀粉酶家族中4个高度保守的酶催化活性区.经多步纯化,重组酶的比活共提高了22.2 倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品;经SDS-PAGE检测,AmyF酶分子量为57kD.该酶的最适反应温度为55℃～60℃,酶的最适反应pH为7.0,在温度不超过55℃时,酶活较稳定;AmyF能迅速降解淀粉生成麦芽寡糖,属于内切糖苷酶.
在仔豬結腸內容物中分離齣一株能利用澱粉的芽孢桿菌Bacillus sp. WS06, 構建瞭全基因組DNA文庫,從中篩選齣α-澱粉酶基因amyF,分析測定瞭其覈苷痠序列併進行瞭錶達;其中amyF編碼的蛋白有526箇氨基痠、分子量為58.6kD;它與已報道的Bacillus megaterium的α-澱粉酶序列有93%的同源性.經過氨基痠序列比較分析還髮現,AmyF含有澱粉酶傢族中4箇高度保守的酶催化活性區.經多步純化,重組酶的比活共提高瞭22.2 倍,穫得凝膠電泳均一的蛋白樣品;經SDS-PAGE檢測,AmyF酶分子量為57kD.該酶的最適反應溫度為55℃～60℃,酶的最適反應pH為7.0,在溫度不超過55℃時,酶活較穩定;AmyF能迅速降解澱粉生成麥芽寡糖,屬于內切糖苷酶.
재자저결장내용물중분리출일주능이용정분적아포간균Bacillus sp. WS06, 구건료전기인조DNA문고,종중사선출α-정분매기인amyF,분석측정료기핵감산서렬병진행료표체;기중amyF편마적단백유526개안기산、분자량위58.6kD;타여이보도적Bacillus megaterium적α-정분매서렬유93%적동원성.경과안기산서렬비교분석환발현,AmyF함유정분매가족중4개고도보수적매최화활성구.경다보순화,중조매적비활공제고료22.2 배,획득응효전영균일적단백양품;경SDS-PAGE검측,AmyF매분자량위57kD.해매적최괄반응온도위55℃～60℃,매적최괄반응pH위7.0,재온도불초과55℃시,매활교은정;AmyF능신속강해정분생성맥아과당,속우내절당감매.
