长江大学学报B（自然科学版）
長江大學學報B（自然科學版）
장강대학학보B（자연과학판）
JOURNAL OF YANGTZE UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
1期
42-46
,共5页
李惠芳%刘荭%吕建强%蔡依娜%田飞焱%李香平%岳志芹%陈昌福
李惠芳%劉葒%呂建彊%蔡依娜%田飛焱%李香平%嶽誌芹%陳昌福
리혜방%류홍%려건강%채의나%전비염%리향평%악지근%진창복
斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒%实时荧光定量PCR%Taqman荧光探针%检测
斑點扠尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒%實時熒光定量PCR%Taqman熒光探針%檢測
반점차미회(Ictalurus Punctatus)병독%실시형광정량PCR%Taqman형광탐침%검측
根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法.特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性.标准曲线表明,在3.3×10～3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系(r=0.998 3),最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高.同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好.该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3 h.试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具.
根據GenBank登錄的斑點扠尾鮰病毒株ORF8基因序列,設計引物和Taqman熒光探針,建立瞭用于檢測斑點扠尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的實時熒光定量PCR方法;對實時熒光定量PCR反應條件進行瞭優化,評估瞭該方法的特異性、靈敏度和重複性,併建立瞭絕對定量方法.特異性試驗證實,該方法隻能檢測到斑點扠尾鮰病毒,與真鯛虹綵病毒、蛙虹綵病毒、錦鯉皰疹病毒、鱖魚傳染性脾腎壞死病毒等多種常見的水生動物病毒沒有交扠反應,具有高度的特異性.標準麯線錶明,在3.3×10～3.3×107拷貝數之間有較好的線性關繫(r=0.998 3),最少可檢測到33箇拷貝的暘性質粒,敏感度很高.同一樣品于試驗內及試驗間的重複性試驗髮現,變異繫數分彆為0.7%和1.2%,重複性較好.該方法的檢測時間從覈痠抽提到齣具結果僅需3 h.試驗結果錶明,採用實時熒光PCR檢測斑點扠尾鮰病毒方法具有特異性好、靈敏度高、檢測耗時短的特點,併且能對病毒進行準確的定量分析,不僅適閤口岸進齣口檢驗檢疫的需求,而且可以作為研究該病毒感染過程的有力工具.
근거GenBank등록적반점차미회병독주ORF8기인서렬,설계인물화Taqman형광탐침,건립료용우검측반점차미회(Ictalurus Punctatus)병독적실시형광정량PCR방법;대실시형광정량PCR반응조건진행료우화,평고료해방법적특이성、령민도화중복성,병건립료절대정량방법.특이성시험증실,해방법지능검측도반점차미회병독,여진조홍채병독、와홍채병독、금리포진병독、궐어전염성비신배사병독등다충상견적수생동물병독몰유교차반응,구유고도적특이성.표준곡선표명,재3.3×10～3.3×107고패수지간유교호적선성관계(r=0.998 3),최소가검측도33개고패적양성질립,민감도흔고.동일양품우시험내급시험간적중복성시험발현,변이계수분별위0.7%화1.2%,중복성교호.해방법적검측시간종핵산추제도출구결과부수3 h.시험결과표명,채용실시형광PCR검측반점차미회병독방법구유특이성호、령민도고、검측모시단적특점,병차능대병독진행준학적정량분석,불부괄합구안진출구검험검역적수구,이차가이작위연구해병독감염과정적유력공구.
