CAJ | 학술논문

菌寄生真菌的几丁质酶有很强的降解几丁质能力,在控制植物病害方面起着重要的作用.为克隆和研究菌寄生真菌黄蓝状菌(Talaromyces flavus)几丁质酶基因(tfchi1),本研究根据真菌几丁质酶基因的保守序列设计扩增基因中间片段的简并引物,采用RT-PCR、3'-RACE及5+-TAIL的方法获得了该基因的DNA和mRNA序列(GenBank:GU361769,GU361770).tfchi1长为2 561 bp,具有6个内含子,长度分别为129、78、68、65、53和59 bp,包含1 194bp的ORF,编码一个由397个氨基酸组成的蛋白.推导的tfchi1氨基酸序列以及蛋白质结构生物信息学分析表明,该蛋白具有典型的几丁质酶催化区保守序列SXGGW和DGXDXDWE,属于糖苷水解酶18家族几丁质酶,与柄篮状菌(Talaromyces stipitatus ATCC 10500)几丁质酶(XP_002480365)氨基酸序列同源性为96％,分子量为43.47kD,等电点为4.97.该蛋白无信号肽序列,有15个潜在的N-糖基化位点,Tfchi1的二级结构以无规卷曲和α-螺旋为蛋白的主要结构元件,三级结构中有(α/β)8的圆桶形结构.tfchi1转化毕赤酵母(Pichia pastoris )GS 115,酵母工程菌可分泌具几丁质酶活性的表达产物,重组蛋白的分子量与理论值相符.结果说明,本研究已从T.flavus中正确克隆了1个糖苷水解酶18家族几丁质酶基因.
균기생진균적궤정질매유흔강적강해궤정질능력,재공제식물병해방면기착중요적작용.위극륭화연구균기생진균황람상균(Talaromyces flavus)궤정질매기인(tfchi1),본연구근거진균궤정질매기인적보수서렬설계확증기인중간편단적간병인물,채용RT-PCR、3'-RACE급5+-TAIL적방법획득료해기인적DNA화mRNA서렬(GenBank:GU361769,GU361770).tfchi1장위2 561 bp,구유6개내함자,장도분별위129、78、68、65、53화59 bp,포함1 194bp적ORF,편마일개유397개안기산조성적단백.추도적tfchi1안기산서렬이급단백질결구생물신식학분석표명,해단백구유전형적궤정질매최화구보수서렬SXGGW화DGXDXDWE,속우당감수해매18가족궤정질매,여병람상균(Talaromyces stipitatus ATCC 10500)궤정질매(XP_002480365)안기산서렬동원성위96％,분자량위43.47kD,등전점위4.97.해단백무신호태서렬,유15개잠재적N-당기화위점,Tfchi1적이급결구이무규권곡화α-라선위단백적주요결구원건,삼급결구중유(α/β)8적원통형결구.tfchi1전화필적효모(Pichia pastoris )GS 115,효모공정균가분비구궤정질매활성적표체산물,중조단백적분자량여이론치상부.결과설명,본연구이종T.flavus중정학극륭료1개당감수해매18가족궤정질매기인.