个体性反义RNA对乳腺癌细胞突变p53基因表达的特异性封闭作用
개체성반의RNA대유선암세포돌변p53기인표체적특이성봉폐작용
Targeted down-regulation of p53 gene expression by individual antisense RNA in vitro
  • 万方数据
    中华病理学杂志 중화병이학잡지
    Chinese Journal of Pathology
    2007年 8期 544-549 ,共6页

    王亚红%孙玉兰%许少峰%张媛媛%张霖%张彬%冯玉梅%牛瑞芳%付丽

    왕아홍%손옥란%허소봉%장원원%장림%장빈%풍옥매%우서방%부려

    乳腺肿瘤%基因,p53%RNA,反义%DNA突变分析 乳腺腫瘤%基因,p53%RNA,反義%DNA突變分析
    유선종류%기인,p53%RNA,반의%DNA돌변분석
    目的 研究针对p53基因突变的个体性反义RNA对乳腺癌突变p53基因的特异性封闭作用.方法 通过免疫细胞化学LSAB法染色、聚合酶链反应-单链构象多态性分析及测序确定人乳腺癌细胞系MDA-MB-231中p53突变位点,构建针对该突变点的反义表达载体并制备其反义RNA.原位杂交技术检测反义RNA与细胞内突变p53基因的特异性结合;在阳离子脂质体介导下将反义RNA转染细胞;以免疫细胞化学LSAB法染色及细胞生长抑制率观测反义RNA作用时效;Western blot检测p53蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐法检测转染细胞的生长活性;流式细胞术检测转染细胞的细胞周期分布;原位缺口末端标记法检测转染细胞的凋亡情况.结果 人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的p53第8外显子(exon8)有突变,据此位点构建反义表达载体[pGEM3zf(+/-)p53exon8].原位杂交结果显示反义RNA(ASp53exon8'RNA)在细胞质内有阳性杂交信号;于转染后48 h反义RNA封闭效果最显著,突变p53蛋白(mt-p53)的表达受抑制,细胞增殖能力下降,G2/M期阻滞.结论 针对p53基因突变位点制备的个体性反义RNA可特异性封闭乳腺癌细胞突变p53基因的表达.
    목적 연구침대p53기인돌변적개체성반의RNA대유선암돌변p53기인적특이성봉폐작용.방법 통과면역세포화학LSAB법염색、취합매련반응-단련구상다태성분석급측서학정인유선암세포계MDA-MB-231중p53돌변위점,구건침대해돌변점적반의표체재체병제비기반의RNA.원위잡교기술검측반의RNA여세포내돌변p53기인적특이성결합;재양리자지질체개도하장반의RNA전염세포;이면역세포화학LSAB법염색급세포생장억제솔관측반의RNA작용시효;Western blot검측p53단백적표체;사갑기우담서염법검측전염세포적생장활성;류식세포술검측전염세포적세포주기분포;원위결구말단표기법검측전염세포적조망정황.결과 인유선암세포계MDA-MB-231적p53제8외현자(exon8)유돌변,거차위점구건반의표체재체[pGEM3zf(+/-)p53exon8].원위잡교결과현시반의RNA(ASp53exon8'RNA)재세포질내유양성잡교신호;우전염후48 h반의RNA봉폐효과최현저,돌변p53단백(mt-p53)적표체수억제,세포증식능력하강,G2/M기조체.결론 침대p53기인돌변위점제비적개체성반의RNA가특이성봉폐유선암세포돌변p53기인적표체.
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