CAJ | 학술논문

目的鉴定骨髓间充质干细胞(MSC)在体外不诱导的条件下移植于掺钕钇铝石榴石(Nd:YAG)激光损伤大鼠视网膜后的定位以及蛋白表达情况.方法体外培养大鼠MSCs,用荧光染料4′,6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记MSCs, 视网膜下移植后分别于10、20、35和 50 d处死动物,做DAPI荧光观察,并在阳性的连续切片上作神经元核(NeuN), 神经元特异性烯醇化酶(NSE), 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和角蛋白(CK)免疫组化染色及HE染色.分别于损伤前及损伤后即刻、1～7周检测损伤移植组、损伤组和损伤注射生理盐水组的视网膜电图(ERG)b波分析.结果培养的MSC集落生长迅速,均一性好;DAPI染色观察表明,10 d时移植细胞多集中于移植部位周围,但分布散乱;20 d时可见阳性细胞分布范围扩大,分布于视网膜视锥、视干细胞层、双极细胞层及节细胞层;到35 d阳性细胞范围进一步扩大,且细胞向损伤部位迁移; 50 d观察损伤范围与35 d相比扩大不明显.免疫组织化学染色发现阳性区域的细胞在NeuN、NSE、GFAP和CK 的表达有不均一性.检测到的阳性区域视网膜未见到玫瑰花结样结构,但某些区域的细胞排列不整齐,在某些部位有细胞层增生.HE染色表明移植组损伤的恢复好于损伤对照组,ERG b波检测表明5周后损伤移植组的b波水平高于对照组.结论 MSC在视网膜下移植后可与原视网膜结构相融合,检测到的阳性细胞分布于视网膜色素上皮层、视细胞层、双极细胞层及节细胞层,但细胞的排列和蛋白表达仍有紊乱.MSC的移植对激光损伤斑及ERG b波的恢复有促进作用.
목적감정골수간충질간세포(MSC)재체외불유도적조건하이식우참녀을려석류석(Nd:YAG)격광손상대서시망막후적정위이급단백표체정황.방법체외배양대서MSCs,용형광염료4′,6-이미-2-분기신타(DAPI)표기MSCs, 시망막하이식후분별우10、20、35화 50 d처사동물,주DAPI형광관찰,병재양성적련속절편상작신경원핵(NeuN), 신경원특이성희순화매(NSE), 효질섬유산성단백(GFAP)화각단백(CK)면역조화염색급HE염색.분별우손상전급손상후즉각、1～7주검측손상이식조、손상조화손상주사생리염수조적시망막전도(ERG)b파분석.결과배양적MSC집락생장신속,균일성호;DAPI염색관찰표명,10 d시이식세포다집중우이식부위주위,단분포산란;20 d시가견양성세포분포범위확대,분포우시망막시추、시간세포층、쌍겁세포층급절세포층;도35 d양성세포범위진일보확대,차세포향손상부위천이; 50 d관찰손상범위여35 d상비확대불명현.면역조직화학염색발현양성구역적세포재NeuN、NSE、GFAP화CK 적표체유불균일성.검측도적양성구역시망막미견도매괴화결양결구,단모사구역적세포배렬불정제,재모사부위유세포층증생.HE염색표명이식조손상적회복호우손상대조조,ERG b파검측표명5주후손상이식조적b파수평고우대조조.결론 MSC재시망막하이식후가여원시망막결구상융합,검측도적양성세포분포우시망막색소상피층、시세포층、쌍겁세포층급절세포층,단세포적배렬화단백표체잉유문란.MSC적이식대격광손상반급ERG b파적회복유촉진작용.