CAJ | 학술논문

目的:分析小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因(Beta-site APP cleaving enzyme protein,BACE1)的表达情况.方法:实验于2004-12/2006-06在中山大学中山医学院和上海交通大学农业与生物学院完成.①用脂质体将EGFP基因表达载体pEGFP-C1 Vector和体外转录合成的针对EGFP基因的小干扰RNA(siEGFP)分别或同时转染neuro-2a细胞,在倒置荧光显微镜下计算EGFP在neuro-2a细胞中的表达率.②将体外转录合成的siBACE1-1,siBACE1-2,siBACE1-3转染neuro-2a细胞,干扰24,48,72 h后分别用Real time RT-PCR定量分析siBACE1对内源BACE1基因表达的抑制率和干扰的时效性.结果:①外源EGFP基因转染neuro-2a细胞后,43%neuro-2a细胞高表达EGFP蛋白.通过转染siEGFP则可有效抑制EGFP基因表达.②3个干扰位点的siBACE1对BACE1基因表达有不同的抑制效率,siBACE1-3使BACE1 mRNA表达水平下降60%,siBACE1-1为13%,siBACE1-2对BACE1 mRNA无明显的抑制作用.③siBACE1抑制内源BACE1基因的表达与干扰时间相关,siBACE1干扰24 h、48 h后BACE1 mRNA的表达与正常组无明显差异(P＞0.05),但干扰72 h后,siBACE1-3和siBACE1-1均使BACE1 mRNA表达量下降.结论:体外转录合成的siBACE1能有效抑制neuro-2a细胞内源BACE1基因表达,其抑制率与BACE1基因的干扰位点和干扰时间相关.
목적:분석소간우RNA(small interference RNA,siRNA)억제neuro-2a세포내원β위정분양전체단백렬해매1기인(Beta-site APP cleaving enzyme protein,BACE1)적표체정황.방법:실험우2004-12/2006-06재중산대학중산의학원화상해교통대학농업여생물학원완성.①용지질체장EGFP기인표체재체pEGFP-C1 Vector화체외전록합성적침대EGFP기인적소간우RNA(siEGFP)분별혹동시전염neuro-2a세포,재도치형광현미경하계산EGFP재neuro-2a세포중적표체솔.②장체외전록합성적siBACE1-1,siBACE1-2,siBACE1-3전염neuro-2a세포,간우24,48,72 h후분별용Real time RT-PCR정량분석siBACE1대내원BACE1기인표체적억제솔화간우적시효성.결과:①외원EGFP기인전염neuro-2a세포후,43%neuro-2a세포고표체EGFP단백.통과전염siEGFP칙가유효억제EGFP기인표체.②3개간우위점적siBACE1대BACE1기인표체유불동적억제효솔,siBACE1-3사BACE1 mRNA표체수평하강60%,siBACE1-1위13%,siBACE1-2대BACE1 mRNA무명현적억제작용.③siBACE1억제내원BACE1기인적표체여간우시간상관,siBACE1간우24 h、48 h후BACE1 mRNA적표체여정상조무명현차이(P＞0.05),단간우72 h후,siBACE1-3화siBACE1-1균사BACE1 mRNA표체량하강.결론:체외전록합성적siBACE1능유효억제neuro-2a세포내원BACE1기인표체,기억제솔여BACE1기인적간우위점화간우시간상관.