CAJ | 학술논문

目的:乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是一种反式作用因子,它通过增强各种转录和调控因子的表达影响肝细胞的增殖和凋亡.在原发性肝癌(HCC)的发生发展中发挥重要的作用.Wnt/β-catenin信号转导通路在胚胎发育和肿瘤发生中也发挥了重要的作用.本实验利用腺病毒表达系统,研究HBx与Wnt信号转导通路中主要信号分子β-catenin的相互作用及对它的影响,探讨HBV相关性肝癌的发生机制.方法:通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-GFP和Ad-GFP-HBx,采用表达有绿色荧光蛋白的腺病毒高表达载体系统将HBx基因有效转入人正常肝细胞L02细胞系.通过Western blot证实HBx在L02细胞中有效表达.RT-PCR、Western blot检测转染Ad-GFP-HBx的L02细胞中β-catenin表达的变化.结果:HEK293扩增腺病毒获得的Ad-GFP滴度为:1.5×109 pfu/ml,Ad-GFP-HBx的滴度为:1.0×108pfu/ml.Ad-GFP-HBx腺病毒感染细胞后能使HBx在L02细胞中有效表达,且感染Ad-GFP-HBx后HBx的表达显著增加L02细胞中β-catenin mRNA的表达量(P<0.05)和β-catenin蛋白的表达量(P<0.05).结论:HBx可以上调人正常肝细胞系L02细胞中β-catenin的表达,提示HBx可能通过调控β-catenin的异常表达激活Wnt信号通路.促进原发性肝癌的发生.Wnt信号传导主要取决于β-catenin在细胞内的水平,当β-catenin水平低下,Wnt途径关闭;当β-catellin水平升高时,Wnt途径开启,而Wnt信号的激活与肿瘤的发生密切相关.可见,HBx能增强β-catenin的表达,提示HBx可能是调控β-catenin的关键因子,而β-catenin的异常表达又能激活Wnt信号通路,最终导致肝癌的发生.这也间接证明了HBx在肝癌的发生发展中具有重要的作用,且该作用与Wnt信号中的关键分子β-catenin密切相关.
목적:을형간염병독X단백(HBx)시일충반식작용인자,타통과증강각충전록화조공인자적표체영향간세포적증식화조망.재원발성간암(HCC)적발생발전중발휘중요적작용.Wnt/β-catenin신호전도통로재배태발육화종류발생중야발휘료중요적작용.본실험이용선병독표체계통,연구HBx여Wnt신호전도통로중주요신호분자β-catenin적상호작용급대타적영향,탐토HBV상관성간암적발생궤제.방법:통과HEK293세포확증선병독획득고적도적Ad-GFP화Ad-GFP-HBx,채용표체유록색형광단백적선병독고표체재체계통장HBx기인유효전입인정상간세포L02세포계.통과Western blot증실HBx재L02세포중유효표체.RT-PCR、Western blot검측전염Ad-GFP-HBx적L02세포중β-catenin표체적변화.결과:HEK293확증선병독획득적Ad-GFP적도위:1.5×109 pfu/ml,Ad-GFP-HBx적적도위:1.0×108pfu/ml.Ad-GFP-HBx선병독감염세포후능사HBx재L02세포중유효표체,차감염Ad-GFP-HBx후HBx적표체현저증가L02세포중β-catenin mRNA적표체량(P<0.05)화β-catenin단백적표체량(P<0.05).결론:HBx가이상조인정상간세포계L02세포중β-catenin적표체,제시HBx가능통과조공β-catenin적이상표체격활Wnt신호통로.촉진원발성간암적발생.Wnt신호전도주요취결우β-catenin재세포내적수평,당β-catenin수평저하,Wnt도경관폐;당β-catellin수평승고시,Wnt도경개계,이Wnt신호적격활여종류적발생밀절상관.가견,HBx능증강β-catenin적표체,제시HBx가능시조공β-catenin적관건인자,이β-catenin적이상표체우능격활Wnt신호통로,최종도치간암적발생.저야간접증명료HBx재간암적발생발전중구유중요적작용,차해작용여Wnt신호중적관건분자β-catenin밀절상관.