癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2009年
2期
149-154
,共6页
田文君%冯文莉%王宏斌%黄世峰%曹唯希%黄宗干
田文君%馮文莉%王宏斌%黃世峰%曹唯希%黃宗榦
전문군%풍문리%왕굉빈%황세봉%조유희%황종간
p53基因%信号转导%中心体%K562细胞%Gadd45a%蛋白%BubRl蛋白%AuroraA激酶
p53基因%信號轉導%中心體%K562細胞%Gadd45a%蛋白%BubRl蛋白%AuroraA激酶
p53기인%신호전도%중심체%K562세포%Gadd45a%단백%BubRl단백%AuroraA격매
背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为严重的中心体异常.本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株,以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响.方法:用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞:未接受感染的细胞作为空白对照.流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达.间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化.Western blot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a(growth arrest and DNA damage)、BubR1(Bub 1 related)、Aurora A的表达.结果:成功建立携野生型p53基因的K562细胞株,腺病毒载体感染效率达60%以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达.感染72 h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常(n>2)的细胞比例降至(0.38+0.02)%.与空白对照组(0.72±0.14)%比较其差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubR1表达分别上调93%、88%.而Aurora A的表达下降56%(P值均<0.05).结论:重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达:野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活一非依赖途径使Aurora A的表达下降.从而抑制K562细胞中心体的过度复制.
揹景與目的:腫瘤組織細胞中p53基因突變或缺失是導緻非整倍體的髮生和基因組不穩定的主要原因之一;最近研究髮現慢性粒細胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心體異常,且異常的程度與臨床分期有關,急變期顯示更為嚴重的中心體異常.本研究建立攜野生型p53基因的CML急變K562細胞株,以研究該細胞內野生型p53基因錶達後p53信號轉導通路對K562細胞中心體的影響.方法:用HEK293細胞擴增重組p53野生型、突變型及空載腺病毒載體,聯閤polybrene分彆感染K562細胞:未接受感染的細胞作為空白對照.流式細胞術檢測重組腺病毒載體感染效率,Western blot檢測P53蛋白錶達.間接免疫熒光染色後用激光共聚焦計數K562細胞中心體的變化.Western blot檢測p53信號轉導通路下遊效應分子生長阻滯和DNA損傷應答基因Gadd45a(growth arrest and DNA damage)、BubR1(Bub 1 related)、Aurora A的錶達.結果:成功建立攜野生型p53基因的K562細胞株,腺病毒載體感染效率達60%以上,野生型p53可在K562細胞中持續錶達.感染72 h後,攜野生型p53基因的K562細胞中中心體數量異常(n>2)的細胞比例降至(0.38+0.02)%.與空白對照組(0.72±0.14)%比較其差異有統計學意義(P<0.05);Westernblot結果髮現p53信號轉導通路下遊效應分子Gadd45a、BubR1錶達分彆上調93%、88%.而Aurora A的錶達下降56%(P值均<0.05).結論:重組腺病毒介導的野生型p53基因能夠在白血病K562細胞中持續錶達:野生型P53蛋白可能通過轉錄激活-依賴途徑上調Gadd45a、BubR1錶達以及轉錄激活一非依賴途徑使Aurora A的錶達下降.從而抑製K562細胞中心體的過度複製.
배경여목적:종류조직세포중p53기인돌변혹결실시도치비정배체적발생화기인조불은정적주요원인지일;최근연구발현만성립세포백혈병(chronic myelogenous leukemia,CML)각기환자균유중심체이상,차이상적정도여림상분기유관,급변기현시경위엄중적중심체이상.본연구건립휴야생형p53기인적CML급변K562세포주,이연구해세포내야생형p53기인표체후p53신호전도통로대K562세포중심체적영향.방법:용HEK293세포확증중조p53야생형、돌변형급공재선병독재체,연합polybrene분별감염K562세포:미접수감염적세포작위공백대조.류식세포술검측중조선병독재체감염효솔,Western blot검측P53단백표체.간접면역형광염색후용격광공취초계수K562세포중심체적변화.Western blot검측p53신호전도통로하유효응분자생장조체화DNA손상응답기인Gadd45a(growth arrest and DNA damage)、BubR1(Bub 1 related)、Aurora A적표체.결과:성공건립휴야생형p53기인적K562세포주,선병독재체감염효솔체60%이상,야생형p53가재K562세포중지속표체.감염72 h후,휴야생형p53기인적K562세포중중심체수량이상(n>2)적세포비례강지(0.38+0.02)%.여공백대조조(0.72±0.14)%비교기차이유통계학의의(P<0.05);Westernblot결과발현p53신호전도통로하유효응분자Gadd45a、BubR1표체분별상조93%、88%.이Aurora A적표체하강56%(P치균<0.05).결론:중조선병독개도적야생형p53기인능구재백혈병K562세포중지속표체:야생형P53단백가능통과전록격활-의뢰도경상조Gadd45a、BubR1표체이급전록격활일비의뢰도경사Aurora A적표체하강.종이억제K562세포중심체적과도복제.
