中国家禽
中國傢禽
중국가금
CHINA POULTRY
2011年
10期
21-24
,共4页
陈欣虹%钱琨%郁川%田野%秦爱建
陳訢虹%錢琨%鬱川%田野%秦愛建
진흔홍%전곤%욱천%전야%진애건
内参基因%实时定量PCR%标准品%标准曲线
內參基因%實時定量PCR%標準品%標準麯線
내삼기인%실시정량PCR%표준품%표준곡선
本研究从SPF鸡皮肤中提取总RNA,并反转录为cDNA;以该cDNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出看家基因β-actin和GAPDH,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化DH5α菌,经蓝白斑筛选和质粒酶切鉴定和DNA含量测定,得到定量的β-actin和GAPDH基因融合的重组质粒(pGEM T-actin和pGEM T-GAPDH),即实时定量PCR内参标准品.构建成功的标准品经10倍梯度稀释,作为模板,获得扩增效率良好及可信度高的标准曲线.构建成功的标准品可大量制备,可用于鸡的靶基因定量PCR所需的内参标准品.
本研究從SPF鷄皮膚中提取總RNA,併反轉錄為cDNA;以該cDNA為模闆,通過聚閤酶鏈式反應(PCR)分彆擴增齣看傢基因β-actin和GAPDH,將PCR產物連入pGEM-T easy載體,轉化DH5α菌,經藍白斑篩選和質粒酶切鑒定和DNA含量測定,得到定量的β-actin和GAPDH基因融閤的重組質粒(pGEM T-actin和pGEM T-GAPDH),即實時定量PCR內參標準品.構建成功的標準品經10倍梯度稀釋,作為模闆,穫得擴增效率良好及可信度高的標準麯線.構建成功的標準品可大量製備,可用于鷄的靶基因定量PCR所需的內參標準品.
본연구종SPF계피부중제취총RNA,병반전록위cDNA;이해cDNA위모판,통과취합매련식반응(PCR)분별확증출간가기인β-actin화GAPDH,장PCR산물련입pGEM-T easy재체,전화DH5α균,경람백반사선화질립매절감정화DNA함량측정,득도정량적β-actin화GAPDH기인융합적중조질립(pGEM T-actin화pGEM T-GAPDH),즉실시정량PCR내삼표준품.구건성공적표준품경10배제도희석,작위모판,획득확증효솔량호급가신도고적표준곡선.구건성공적표준품가대량제비,가용우계적파기인정량PCR소수적내삼표준품.
