CAJ | 학술논문

目的：构建针对APP6995的siRNA慢病毒载体，并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法：设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列，同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列，将以上寡核苷酸序列退火后连人pFU-GW-jRNA质粒，酶切和测序鉴定后，将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞，产生具有感染能力的慢病毒颗粒，并感染SH-SY5Y细胞，分未经病毒感染(CON)组、阴性对照病毒感染(NC)组和慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组；应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞APP695 mRNA的表达水平。结果：酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒；各质粒与包装质粒共感染293T细胞后收获慢病毒颗粒；感染SH-SY5Y细胞72 h后，不同组别APP695 mRNA表达水平不同(F=554.442，P＜0.001)，APP695-siRNA组表达水平低于CON组和NC组。结论：成功构建了APP695-siRNA慢病毒载体，该载体可有效沉默SH-SY5Y细胞中APP695 mRNA的表达。
목적：구건침대APP6995적siRNA만병독재체，병검측기대인신경섬유모세포류SH-SY5Y세포주중APP695기인표체적침묵작용。방법：설계병합성침대사선학정적APP695기인과핵감산서렬특이성siRNA유효파서렬，동시합성1대음성대조과핵감산서렬，장이상과핵감산서렬퇴화후련인pFU-GW-jRNA질립，매절화측서감정후，장타문분별여포장질립혼합물공감염293T세포，산생구유감염능력적만병독과립，병감염SH-SY5Y세포，분미경병독감염(CON)조、음성대조병독감염(NC)조화만병독개도양성간우(APP695-RNAi)조；응용실시형광정량PCR(FQ-RT-PCR)검측각조세포APP695 mRNA적표체수평。결과：매절화측서증실목적과핵감산편단이피준학극륭도pFU-GW-iRNA질립；각질립여포장질립공감염293T세포후수획만병독과립；감염SH-SY5Y세포72 h후，불동조별APP695 mRNA표체수평불동(F=554.442，P＜0.001)，APP695-siRNA조표체수평저우CON조화NC조。결론：성공구건료APP695-siRNA만병독재체，해재체가유효침묵SH-SY5Y세포중APP695 mRNA적표체。