西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2011年
12期
6-10
,共5页
王芳%赵献军%雷萌桐%白东宁%王大会%齐雪峰
王芳%趙獻軍%雷萌桐%白東寧%王大會%齊雪峰
왕방%조헌군%뢰맹동%백동저%왕대회%제설봉
产肠毒素大肠杆菌%LT基因%SYBR Green I%实时荧光定量PCR
產腸毒素大腸桿菌%LT基因%SYBR Green I%實時熒光定量PCR
산장독소대장간균%LT기인%SYBR Green I%실시형광정량PCR
构建LT-PMD19质粒标准品,进行SYBR Green荧光定量PCR检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)LT基因,以确定该方法的特异性和灵敏度,绘制标准曲线；通过腹腔注射0.2 mL ETEC菌液建立小鼠腹泻模型,分别于感染后4h、15h、2d、7d和14 d各处死2只,通过建立的荧光定量PCR方法对小肠液中的ETEC的LT基因进行定量检测.研究结果显示,用建立的荧光定量PCR检测LT基因无非特异性扩增,标准曲线呈良好的线性关系(R2=0.999),标准品的熔解曲线均呈单峰,灵敏度为8.18×103拷贝数/μL；小鼠感染4h后LT毒素含量最高,剖检可见小肠肿大,充满黄绿色的内容物,感染后7d、14 d均未检测出LT毒素,肠道未见明显病变,表明LT肠毒素在肠道内的生成规律与肠道病变损伤呈正相关.
構建LT-PMD19質粒標準品,進行SYBR Green熒光定量PCR檢測產腸毒素大腸桿菌(ETEC)LT基因,以確定該方法的特異性和靈敏度,繪製標準麯線；通過腹腔註射0.2 mL ETEC菌液建立小鼠腹瀉模型,分彆于感染後4h、15h、2d、7d和14 d各處死2隻,通過建立的熒光定量PCR方法對小腸液中的ETEC的LT基因進行定量檢測.研究結果顯示,用建立的熒光定量PCR檢測LT基因無非特異性擴增,標準麯線呈良好的線性關繫(R2=0.999),標準品的鎔解麯線均呈單峰,靈敏度為8.18×103拷貝數/μL；小鼠感染4h後LT毒素含量最高,剖檢可見小腸腫大,充滿黃綠色的內容物,感染後7d、14 d均未檢測齣LT毒素,腸道未見明顯病變,錶明LT腸毒素在腸道內的生成規律與腸道病變損傷呈正相關.
구건LT-PMD19질립표준품,진행SYBR Green형광정량PCR검측산장독소대장간균(ETEC)LT기인,이학정해방법적특이성화령민도,회제표준곡선；통과복강주사0.2 mL ETEC균액건립소서복사모형,분별우감염후4h、15h、2d、7d화14 d각처사2지,통과건립적형광정량PCR방법대소장액중적ETEC적LT기인진행정량검측.연구결과현시,용건립적형광정량PCR검측LT기인무비특이성확증,표준곡선정량호적선성관계(R2=0.999),표준품적용해곡선균정단봉,령민도위8.18×103고패수/μL；소서감염4h후LT독소함량최고,부검가견소장종대,충만황록색적내용물,감염후7d、14 d균미검측출LT독소,장도미견명현병변,표명LT장독소재장도내적생성규률여장도병변손상정정상관.
