医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2012年
5期
31-34
,共4页
丁军颖%伊瑶%卢学新%苏秋东%田瑞光%邱丰%毕胜利
丁軍穎%伊瑤%盧學新%囌鞦東%田瑞光%邱豐%畢勝利
정군영%이요%로학신%소추동%전서광%구봉%필성리
丁肝%基因工程%抗原%表达
丁肝%基因工程%抗原%錶達
정간%기인공정%항원%표체
目的 确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础.方法 在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS - PAGE电泳,经Image Lab软件分析,比较目的蛋白表达量,确定最佳表达条件.结果 在25℃、29℃、33℃和37℃条件下,蛋白表达量无统计意义的差别；在添加IPTG后的1、2、3、4、5和6h,表达量无统计意义的差别；在以0.25、0.5、1、2和4mmol/L IPTG诱导时,表达量无统计意义的差别.当添加诱导剂前,菌种的OD600值分别为1.236、0.772、0.542和0.384,目的蛋白表达量有显著意义的差别.以OD600值为1.236和0.772时,表达量最高,两者之间无统计意义的差别；OD600值为0.542时,表达量次之；OD600值为0.384时,表达量最低.结论 温度、表达时间和IPTG浓度在一定范围内对丁肝抗原蛋白表达量无影响；菌种的浓度是影响蛋白表达量的决定性因素；当菌种浓度在OD600值约为0.7～1.2时,以0.25mmolL IPTG在37℃,诱导表达1h为最佳表达条件.该条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的41.5％.
目的 確定以大腸桿菌錶達丁肝抗原的最佳條件,為規模生產以求研髮丁肝ELISA診斷試劑奠定基礎.方法 在不同溫度、時間、IPTG和菌種濃度條件下,分彆進行蛋白錶達,取等體積樣本進行SDS - PAGE電泳,經Image Lab軟件分析,比較目的蛋白錶達量,確定最佳錶達條件.結果 在25℃、29℃、33℃和37℃條件下,蛋白錶達量無統計意義的差彆；在添加IPTG後的1、2、3、4、5和6h,錶達量無統計意義的差彆；在以0.25、0.5、1、2和4mmol/L IPTG誘導時,錶達量無統計意義的差彆.噹添加誘導劑前,菌種的OD600值分彆為1.236、0.772、0.542和0.384,目的蛋白錶達量有顯著意義的差彆.以OD600值為1.236和0.772時,錶達量最高,兩者之間無統計意義的差彆；OD600值為0.542時,錶達量次之；OD600值為0.384時,錶達量最低.結論 溫度、錶達時間和IPTG濃度在一定範圍內對丁肝抗原蛋白錶達量無影響；菌種的濃度是影響蛋白錶達量的決定性因素；噹菌種濃度在OD600值約為0.7～1.2時,以0.25mmolL IPTG在37℃,誘導錶達1h為最佳錶達條件.該條件下,目的蛋白錶達量佔菌體總蛋白的41.5％.
목적 학정이대장간균표체정간항원적최가조건,위규모생산이구연발정간ELISA진단시제전정기출.방법 재불동온도、시간、IPTG화균충농도조건하,분별진행단백표체,취등체적양본진행SDS - PAGE전영,경Image Lab연건분석,비교목적단백표체량,학정최가표체조건.결과 재25℃、29℃、33℃화37℃조건하,단백표체량무통계의의적차별；재첨가IPTG후적1、2、3、4、5화6h,표체량무통계의의적차별；재이0.25、0.5、1、2화4mmol/L IPTG유도시,표체량무통계의의적차별.당첨가유도제전,균충적OD600치분별위1.236、0.772、0.542화0.384,목적단백표체량유현저의의적차별.이OD600치위1.236화0.772시,표체량최고,량자지간무통계의의적차별；OD600치위0.542시,표체량차지；OD600치위0.384시,표체량최저.결론 온도、표체시간화IPTG농도재일정범위내대정간항원단백표체량무영향；균충적농도시영향단백표체량적결정성인소；당균충농도재OD600치약위0.7～1.2시,이0.25mmolL IPTG재37℃,유도표체1h위최가표체조건.해조건하,목적단백표체량점균체총단백적41.5％.
