军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2003年
4期
268-270
,共3页
齐连权%付玲%于长明%于婷%徐春娥%王海涛%陈薇
齊連權%付玲%于長明%于婷%徐春娥%王海濤%陳薇
제련권%부령%우장명%우정%서춘아%왕해도%진미
ω干扰素%毕赤酵母%基因表达
ω榦擾素%畢赤酵母%基因錶達
ω간우소%필적효모%기인표체
目的:在巴斯德毕赤酵母中表达及纯化人ω干扰素(interferon ω, IFN-ω)以对其功能进行深入研究.方法:用PCR方法扩增人IFN-ω基因,与分泌型酵母表达载体pMEX9K重组,经酶切、PCR和序列测定证实重组表达载体pMEX9Kω构建正确.将重组载体pMEX9Kω用SalⅠ酶切后,转化毕赤酵母GS115.得到的转化子经诱导表达后在发酵上清中有人IFN-ω的表达,表达量为4×109 U/L.经过 Butyl Sepharose 4 FF疏水层析柱,SP Sepharose FF离子交换柱和Superdex 75凝胶过滤三步层析纯化,利用反相HPLC分析纯化的重组蛋白.结果:得到了纯度>99% 的重组IFN-ω.N端氨基酸序列测定表明重组人IFN-ω具有正确的N端氨基酸残基顺序,相对分子质量为22 000,并具有同天然蛋白相似的比活性.结论:在毕赤酵母中成功地表达并纯化得到了同天然蛋白具有相似的比活性的人IFN-ω.
目的:在巴斯德畢赤酵母中錶達及純化人ω榦擾素(interferon ω, IFN-ω)以對其功能進行深入研究.方法:用PCR方法擴增人IFN-ω基因,與分泌型酵母錶達載體pMEX9K重組,經酶切、PCR和序列測定證實重組錶達載體pMEX9Kω構建正確.將重組載體pMEX9Kω用SalⅠ酶切後,轉化畢赤酵母GS115.得到的轉化子經誘導錶達後在髮酵上清中有人IFN-ω的錶達,錶達量為4×109 U/L.經過 Butyl Sepharose 4 FF疏水層析柱,SP Sepharose FF離子交換柱和Superdex 75凝膠過濾三步層析純化,利用反相HPLC分析純化的重組蛋白.結果:得到瞭純度>99% 的重組IFN-ω.N耑氨基痠序列測定錶明重組人IFN-ω具有正確的N耑氨基痠殘基順序,相對分子質量為22 000,併具有同天然蛋白相似的比活性.結論:在畢赤酵母中成功地錶達併純化得到瞭同天然蛋白具有相似的比活性的人IFN-ω.
목적:재파사덕필적효모중표체급순화인ω간우소(interferon ω, IFN-ω)이대기공능진행심입연구.방법:용PCR방법확증인IFN-ω기인,여분비형효모표체재체pMEX9K중조,경매절、PCR화서렬측정증실중조표체재체pMEX9Kω구건정학.장중조재체pMEX9Kω용SalⅠ매절후,전화필적효모GS115.득도적전화자경유도표체후재발효상청중유인IFN-ω적표체,표체량위4×109 U/L.경과 Butyl Sepharose 4 FF소수층석주,SP Sepharose FF리자교환주화Superdex 75응효과려삼보층석순화,이용반상HPLC분석순화적중조단백.결과:득도료순도>99% 적중조IFN-ω.N단안기산서렬측정표명중조인IFN-ω구유정학적N단안기산잔기순서,상대분자질량위22 000,병구유동천연단백상사적비활성.결론:재필적효모중성공지표체병순화득도료동천연단백구유상사적비활성적인IFN-ω.
