中国微生态学杂志
中國微生態學雜誌
중국미생태학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY
2005年
4期
249-251,253
,共4页
魏桂芳%张宇镭%刘惠莉%赵立平
魏桂芳%張宇鐳%劉惠莉%趙立平
위계방%장우뢰%류혜리%조립평
冠状病毒%通用引物%TaqMan探针
冠狀病毒%通用引物%TaqMan探針
관상병독%통용인물%TaqMan탐침
目的感染冠状病毒的动物向环境排毒主要是通过粪便,建立直接从粪便样品对动物冠状病毒进行检测的分子技术具有重要的公共卫生学意义.方法通过计算机模拟和实验方法对已报道的2对针对冠状病毒pol基因的通用引物的通用性进行了验证.不经传统的病毒分离,直接从环境样品中提取病毒RNA,通过一步法RT-PCR进行检测,并通过分子杂交和Nested PCR扩增结合TaqMan探针实时荧光检测的PCR技术,提高对冠状病毒检测的灵敏度和准确度,并对猪、禽冠状病毒感染的临床样品进行分析检测.结果2对引物可以覆盖所有已知的冠状病毒,包括SARS,RT-PCR产物通过测序可以确定冠状病毒种类;实时荧光定量Nested PCR有很高的灵敏度,可以灵敏地检出所有供试的阳性样品,而荧光增量实时监测可以排除凝胶电泳检查的假阳性.结论该研究为从环境中普查和鉴定冠状病毒提供了可靠的技术方法.
目的感染冠狀病毒的動物嚮環境排毒主要是通過糞便,建立直接從糞便樣品對動物冠狀病毒進行檢測的分子技術具有重要的公共衛生學意義.方法通過計算機模擬和實驗方法對已報道的2對針對冠狀病毒pol基因的通用引物的通用性進行瞭驗證.不經傳統的病毒分離,直接從環境樣品中提取病毒RNA,通過一步法RT-PCR進行檢測,併通過分子雜交和Nested PCR擴增結閤TaqMan探針實時熒光檢測的PCR技術,提高對冠狀病毒檢測的靈敏度和準確度,併對豬、禽冠狀病毒感染的臨床樣品進行分析檢測.結果2對引物可以覆蓋所有已知的冠狀病毒,包括SARS,RT-PCR產物通過測序可以確定冠狀病毒種類;實時熒光定量Nested PCR有很高的靈敏度,可以靈敏地檢齣所有供試的暘性樣品,而熒光增量實時鑑測可以排除凝膠電泳檢查的假暘性.結論該研究為從環境中普查和鑒定冠狀病毒提供瞭可靠的技術方法.
목적감염관상병독적동물향배경배독주요시통과분편,건립직접종분편양품대동물관상병독진행검측적분자기술구유중요적공공위생학의의.방법통과계산궤모의화실험방법대이보도적2대침대관상병독pol기인적통용인물적통용성진행료험증.불경전통적병독분리,직접종배경양품중제취병독RNA,통과일보법RT-PCR진행검측,병통과분자잡교화Nested PCR확증결합TaqMan탐침실시형광검측적PCR기술,제고대관상병독검측적령민도화준학도,병대저、금관상병독감염적림상양품진행분석검측.결과2대인물가이복개소유이지적관상병독,포괄SARS,RT-PCR산물통과측서가이학정관상병독충류;실시형광정량Nested PCR유흔고적령민도,가이령민지검출소유공시적양성양품,이형광증량실시감측가이배제응효전영검사적가양성.결론해연구위종배경중보사화감정관상병독제공료가고적기술방법.
